Expresión y función de una nueva proteína que se activa en páncreas durante la pancreatitis aguda.

VACCARO MI; DUSETTI NJ; ROPOLO A; GRASSO D; ZEFF N; IOVANNA JL

Buenos Aires

Congreso; Congreso Argentino de Gastroenterología y Endoscopía Digestiva; 2000

Sociedad Argentina de Gastroenterología

Durante la fase aguda de la pancreatitis, la expresión de genes que codifican enzimas secretorias, que son potencialmente peligrosas, esta reducida como parte de una mecanismo de defensa. Por el contrario, otros genes son fuertemente activados, éstos podrían prevenir la evolución de la enfermedad o inducir la regeneración del tejido. La finalidad de nuestra investigación es caracterizar a nivel molecular el programa de emergencia celular que se pone en marcha durante la pancreatitis. En este trabajo, describimos el clonado, la secuenciación y la expresión de un nuevo gen, que llamamos VMP1 (Proteína de Membrana de las Vacuolas). El análisis de la secuencia del ADN complementario reveló un marco de lectura que codifica una proteína de 406 aminoácidos. Aunque no se identificaron secuencias relacionadas, el análisis de su estructura sugirió que VMP1 es una proteína de membrana con 6 regiones hidrofóbicas. El gen para VMP1 generó 2 transcriptos de 1.9 y 3.5 kb, ambos fuertemente inducidos en páncreas durante la pancreatitis experimental (n=10). Los estudios mediante hibridización in situ revelaron que la expresión pancreática del ARN mensajero para VMP1 estuvo restringida a la célula acinar durante la pancreatitis aguda inducida por ceruleína. Los islotes de Langerhans y los ductos no mostraron señal del transcripto. Para identificar la localización intracelular de esta proteína, construimos un plásmido con el gen de VMP1 fusionado al de un péptido fluorescente inducible por tetraciclina. La proteína VMP1 marcada resultante fue localizada en la membrana del retículo endoplásmico. La sobre-expresión de esta proteína en células en cultivo promovió la formación de vacuolas intracitoplasmáticas en todos los experimentos y la VMP1 fue localizada en las membranas de estas vacuolas. En conclusión, identificamos una nueva proteína de membrana que es fuertemente inducida en células acinares durante la fase aguda de la pancreatitis y que promueve la formación de vacuolas intracelulares.