La expresión de la Proteína de Membrana Vacuolar 1 (VMP1) promueve la formación de autofagosomas y participa en la autofagia inducida por la pancreatitis experimental. Galardonado con el Premio de la Fundación Cherny

ROPOLO A; GRASSO D; PARDO R; SACCHETTI ML; LO RE A; FABIANO LE; VACCARO MI

Mar del Plata

Congreso; LII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2007

Sociedad Argentina de Investigación Clínica, Sociedad Argentina de Inmunología y la Sociedad Argentina de Fisiología.

En trabajos previos caracterizamos a una nueva proteína de membrana (VMP1) cuya expresión induce la formación de vacuolas y es fuertemente activada en pancreatitis aguda, una enfermedad que presenta cambios morfológicos característicos de autofagia. El objetivo de este trabajo fue demostrar que la expresión de VMP1 promueve el proceso autofágico. Se construyeron plásmidos de expresión para VMP1-V5 y VMP1-EGFP, y un siRNA específico para VMP1. Los estudios se realizaron sobre las líneas celulares HeLa y 293T. Los resultados mostraron que la proteína de fusión fluorescente VMP1-EGFP se encuentra en la membrana de vacuolas inducidas por su expresión. La microscopía electrónica mostró que estas vacuolas tienen características ultraestructurales de autofagia. Por otro lado, el tratamiento con 3-MA, un inhibidor de autofagia, inhibió la formación de vacuolas inducida por la expresión de VMP1. Las células sometidas a ayuno o tratadas con rapamicina, tratamientos utilizados para inducir autofagia, activaron la expresión de VMP1. Los estudios mediante inmunofluorescencia y microscopía confocal confirmaron que VMP1 está localizada en vacuolas autofágicas y colocaliza con LC3, un marcador específico de membrana de autofagosomas. En otra serie de experimentos en que la expresión de VMP1 fue silenciada mediante la estrategia siRNA, se comprobó que ni el ayuno ni el tratamiento con rapamicina indujeron autofagia, demostrando que la expresión de VMP1 es requerida para el proceso autofágico. Por último, estudios in vivo permitieron comprobar que VMP1 esta ubicada en la membrana del autofagosoma en la célula acinar durante la pancreatitis aguda experimental. En conclusión, la expresión de VMP1 induce la formación de autofagosomas, y es necesaria para la autofagia inducida por estímulos extracelulares. El hecho de que esta proteína esté implicada en la fisiopatología de la pancreatitis permitirá futuros estudios sobre el rol de la autofagia como respuesta celular a la enfermedad.