LA AUTOFAGIA INDUCIDA POR LA EXPRESION TRANSGENICA DE VMP1 (VACUOLE MEMBRANE PROTEIN 1) PREVIENE LA SEVERIDAD DE LA PANCREATITIS AGUDA MEDIANTE LA DEGRADACION SELECTIVA DE GRANULOS DE ZIMOGENO.

GRASSO, D; ROPOLO A; LO RÉ, A; BOGGIO, V; VACCARO, MI

Mar del Plata, Argentina.

Congreso; LIV Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2009

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La autofagia es un proceso degradativo y la única vía celular capaz de degradar organelas completas. VMP1 es una proteína de autofagia inducida por la pancreatitis aguda (PA) que gatilla la formación de autofagosomas. Los eventos celulares tempranos durante la PA incluyen activación de zimógenos y formación de vesículas autofágicas. El objetivo fue evaluar el rol de la autofagia mediada por VMP1 durante la PA experimental. Desarrollamos un ratón transgénico (TG) que expresa VMP1-EGFP en páncreas exocrino. Se generó PA por Caerulein (Cae 50 ¦Ìg/Kg). La microscopia electrónica de páncreas de TG tratado con Cae presentó autofagosomas con gránulos de zimogenos en su interior. Utilizando beads magnéticos y anticuerpo anti-GFP aislamos específicamente autofagosomas conteniendo gránulos de zimogeno del sobrenadante posnuclear. La colocalizacion inmunofluorescente del marcador autofagico LC3 en vesículas positivas para tripsina corroboró la autofagia de granulos de zimógeno. Mediante un sustrato fluorescente de tripsina en acinos pancreáticos aislados tratados con Cae observamos temprana activación de tripsinógeno en el WT mientras que el TG evidenció poca tripsina activa y restringida a puntos específicos que colocalizaron con VMP1. Dos inhibidores de autofagia revirtieron este efecto, confirmando que los gránulos de zimógeno afectados son degradados por un proceso autofagico selectivo -zimofagia-. Finalmente, evaluamos la relevancia fisiológica de la zimofagia en PA. El TG presentó menos edema y hemorragia en páncreas y menor amilasemia y lipasemia (p<0.001 vs WT). El páncreas TG presentó significativa disminución del porcentaje de infiltrado y de la actividad de MPO (p<0.001) y reducción del área necrótica (p<0,001). Los resultados muestran que la autofagia mediada por VMP1 degrada selectivamente gránulos de zimogeno activados reduciendo la severidad de la pancreatitis. Este estudio identifica una función crítica de la autofagia en la respuesta celular a la enfermedad.