La interacción entre VMP1 y Beclin 1 es necesaria para la formación del autofagosoma.

GRASSO D; ROPOLO A; PARDO R; VACCARO MI

Mar del Plata

Congreso; LII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2007

Sociedad Argentina de Investigación Clínica, Sociedad Argentina de Inmunología y la Sociedad Argentina de Fisiología

VMP1 es una proteína de membrana caracterizada por su fuerte expresión durante la pancreatitis. VMP1 es necesaria en la autofagia, y su expresión induce la formación de autofagosomas. Beclin 1 participa en los primeros eventos moleculares de la autofagia. El objetivo de nuestro trabajo fue demostrar que VMP1 interacciona con Beclin 1 para promover autofagia. En modelos celulares utilizando proteínas fluorescentes mostramos que VMP1-EGFP colocaliza con CFP-Beclin 1 y RFP-LC3, un marcador específico de autofagosomas. Esto sugiere que Beclin 1 se localiza en las vacuolas inducidas por VMP1. En ensayos "pull-down" con lisados de células HeLa expresando VMP1-His6, se detectó Beclin 1 en los eluatos. En los mismos lisados, el anticuerpo para Beclin 1 precipitó VMP1. Estos resultados indican una interacción entre VMP1 y Beclin 1. En células sometidas a ayuno y tratadas con Rapamicina para inducir autofagia, ambas proteínas endógenas inmunoprecipitaron, indicando que la interacción  VMP1-Beclin 1 tiene relevancia fisiológica. Utilizando proteínas recombinantes encontramos que el dominio carboxilo-terminal (Atg) de VMP1 interacciona con Beclin 1. Mediante una deleción específica, se obtuvo un plásmido de expresión de la proteína deficiente en el dominio Atg (VMP1¦¤Atg). Comprobamos que, si bien VMP1¦¤Atg es también una proteína trans-membrana, ésta no fue capaz de retener a Beclin 1 en el ensayo "pull-down". Por otro lado, la expresión de VMP1¦¤Atg no indujo reclutamiento de Beclin 1 ni de LC3, probando que la mutante no es capaz de inducir autofagia. Finalmente, estudios utilizando un modelo de pancreatitis experimental permitieron comprobar que VMP1 y Beclin 1 colocalizan in vivo en los autofagosomas. En conclusión, la interacción VMP1-Beclin 1 a través del dominio Atg de VMP1 es esencial para la formación del autofagosoma. Proponemos que VMP1 interactúa con Beclin 1 para promover el proceso autofágico y que esta interacción tendría relevancia fisiopatológica.