La autofagia previene la muerte celular inducida por ceruleína en células acinares pancreáticas

GRASSO, D; ROPOLO, A; LO RÉ, A; PARDO, R; VACCARO, MI

Mar del Plata

Congreso; LIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica 2008; 2008

Sociedad Argentina de Investigación Clínica y Sociedad Argentina de Fisiología.

LA AUTOFAGIA PREVIENE LA MUERTE CELULAR INDUCIDA POR CERULEINA EN CELULAS ACINARES PANCREATICAS  D Grasso 1 , A Ropolo 1 , A Lo Ré 1 , R Pardo 1 , M I Vaccaro 1 ,  1Dpto Fisiologia, Facultad De Medicina, Universidad De Buenos Aires VMP1 (Vacuole Membrane Protein) es una nueva proteína relacionada a la autofagia que es fuertemente activada en células acinares en respuesta a la pancreatitis aguda. En trabajos previos, demostramos que la expresión de VMP1 gatilla autofagia en células de mamífero y que VMP1 co-localiza con LC3, un marcador específico de autofagia, en la membrana de los autofagosomas inducidos por la pancreatitis. Nuestro objetivo fue estudiar el rol de la autofagia mediada por VMP1 en células acinares en respuesta al tratamiento con ceruleina (Cae). Tratamos células AR42J con dosis supramáximas de Cae en función del tiempo. Usando RT-PCR y Western blot demostramos que el tratamiento con Cae induce la expresión de VMP1 en células AR42J. El tratamiento también indujo autofagia, que fue  demostrada por el reclutamiento de RFP-LC3 en estructuras puntuales y el análisis de LC3-I y LC3-II por Western blot. Usando la tinción con azul tripán, mostramos que el tratamiento con Cae conduce a la muerte del 50% de las células a las 5 h de tratamiento. Con el objetivo de saber si la expresión de VMP1 está directamente involucrada en la autofagia inducida por Cae, la expresión de VMP1 fue silenciada usando dos VMP1-siRNA diferentes. Encontramos que el silenciamiento de VMP1 impidió el desarrollo de autofagia inducida por Cae a la vez que disminuyó significativamente la sobrevida de las células AR42J bajo el tratamiento con Cae. Este efecto se revirtió al transfectar las células con un plásmido de expresión de VMP1. Los resultados fueron confirmados utilizando células acinares aisladas de páncreas de rata tratadas con Cae y después de la inhibición de la autofagia con 3-metil adenina o cloroquina. Nuestros resultados indican que la expresión de VMP1 media la autofagia inducida por Cae y sugieren que la autofagia previene la muerte de las células acinares en respuesta a la ceruleina.