MÉTODO ELECTROFORÉTICO PARA CARACTERIZAR RIZOBIOS

ALICIA ESTER GRASSANO; ANA LÍA RONCHI; CARLOS ALBERTO MOLDES; SILVANA WITT; PATRICIA GARCÍA ARHEX

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; I Congreso Latinoamericano de Fitoquímica; 2002

Sociedad Latinoamericana de Fitoquímica

Actualmente las metodologías empleada para caracterizar rizobios utilizados en la producción de inoculantes comerciales se basa en el estudio de propiedades genotípicas o fenotípicas. En razón de esto el objetivo del presente trabajo fue encontrar un método que permitiera en menor tiempo y con costos más reducidos identificar y/o caracterizar al rizobio en función de patrones preestablecidos determinando al mismo tiempo la velocidad de crecimiento con el fin de su aplicabilidad a la tecnología de producción de inoculantes. Se trabajó con 25 cepas conocidas de los géneros Sinorhizobium, Rhizobium, Bradyrhizobium y Mesorhizobium, se aplicó a ellas el método de multilocus enzimático haciéndolas crecer en medio TY (triptona - extracto de levadura) y desarrollando la electroforesis en geles de poliacrilamida. El revelado se hizo para  y/o  esterasas y como resultado de las corridas electroforéticas se observó una correlación entre los tiempos de revelado y las variables velocidad de crecimiento () y tiempo de generación (g) que cuantifican el crecimiento de los microorganismos. Para corroborar esta correlación se desarrolló, con los microorganismos crecidos en medio TY la reacción de color colocando las muestras enzimáticas con el sustrato y revelador correspondiente para  y/o  esterasas. Se realizó un barrido espectral para determinar la máxima absorvancia y a esa longitud de onda, se cuantificó la reacción de color desarrollada, según que la muestra proviniera de una preparación de cepas de crecimiento lento, meso o rápido. Como resultado se determinó un máximo expectral para cada una, que se corresponde con los tiempos necesarios para obtener los electroforetogramas con una correcta definición de bandas. De esta manera una vez aislado el rizobio, en una misma operación, se puede determinar su velocidad de crecimiento y realizar un primer análisis taxonómico en comparación con cepas patrones.