Aislamiento y Caracterización molecular de Parvovirus porcino en Argentina

ASPITIA C; CAPPUCCIO J; DIBARBORA M; G. METZ; ECHEVERRÍA M. G.; M. SERENA

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Virología.; 2017

Asociación Argentina de Virología

El Parvovirus porcino (PPV) pertenece a la familia Parvoviridae y es de genoma ADN de cadena simple. Está ampliamente distribuido en la población porcina de cerdos domésticos y salvajes, y es la causa infecciosa más importante asociado a fallas reproductivas. Varios trabajos han reportado la variación genética del PPV demostrando que cepas de campo son genéticamente diferentes a las cepas de referencias y/o vacunales. En la Argentina las fallas reproductivas causadas por el virus siguen causando problema con menor número de nacidos vivos y consecuentes pérdidas económicas. Los objetivos de este trabajo fueron identificar la presencia de PPV en fetos de una granja porcina con sanidad controlada, realizar el primer aislamiento en cultivo celular y posteriormente analizar la variabilidad genética de las cepas aisladas. Se recolectaron 131 fetos y/o momias de una granja porcina de cría intensiva ubicada en la provincia de Santa Fe. En forma estéril se extrajeron muestras de órganos que fueron procesadas para aislamiento viral y extracción de ADN utilizando kit comercial. Para el aislamiento viral se utilizaron células CPK) crecidas en MEM con 10% de suero fetal bovino. El título infeccioso se determinó mediante la técnica de Hemoaglutinación. La presencia del genoma viral tanto en las células infectadas como en los pools de órganos analizados de cada feto fue detectada por PCR con la utilización de cebadores específicos para el gen que codifica para NS1 (145bp). Posteriormente, se amplificó el fragmento que codifica para VP2 (530pb), el cual fue purificado y secuenciado. Las secuencias obtenidas fueron analizadas mediante NCBI BLAST y el programa MEGA7.0 fue utilizado para el estudio de variabilidad genética realizado con secuencias disponibles en el Genbank. Del total de fetos analizados, 16 de ellos resultaron positivos a la técnica de PCR utilizando cebadores para NS1. A partir de la secuenciación del fragmento VP2 se obtuvieron 10 secuencias que fueron comparadas con las de referencia disponibles en la base de datos. Se lograron 4 aislamientos en CPK de los cuales sólo uno fue citopático. El título viral de los aislamientos osciló entre 1:64 y 1:256 UH. Todas las secuencias argentinas mostraron alto porcentaje de similitud entre sí y todas pertenecen al tipo Parvovirus porcino tipo 1 (PPV1) con un 100% de identidad con la cepa de referencia NADL-2. Mediante este estudio se lograron aislar las primeras cepas de PPV reportadas en Argentina. Este trabajo abre el camino a futuros análisis en diferentes zonas de nuestro país, que con el aislamiento de nuevas cepas así como la obtención de fragmentos del genoma y el estudio de variabilidad genética permitirán analizar la protección de las vacunas actuales y responder a nuevas demandas de inmunógenos capaces de controlar dicha enfermedad.