Haplotipos mitocondriales en guanacos de la Patagonia mediante PCR-SSCP

MATÉ M.L.; DI ROCCO F.; DE LAMO D.; VON THUNGEN J.; ZAMBELLI A.; VIDAL-RIOJA L.

San Carlos de Bariloche, Río Negro

Simposio; Aprovechamiento sustentable de guanacos en Argentina; 2004

INTA-Bariloche, ANPCyT, CONICET

La identificación, clonado y secuenciación de la Región Control del ADN mitocondrial de 5 individuos de cada especie de Camélidos Sudamericanos nos permitió identificar un fragmento hipervariable de 337 pb, que concentra 10 sitios polimórficos. El análisis de la secuencia de dicho fragmento permitió definir 5 haplotipos mitocondriales diferentes. Los animales clonados, representantes de estos haplotipos, fueron posteriormente diferenciados mediante PCR-SSCP (polimorfismo de conformación de cadena simple). El objetivo del presente trabajo consistió en la tipificación mitocondrial de 157 guanacos pertenecientes a cinco núcleos de cría de la Patagonia Argentina (La Esperanza, Río Mayo, Pilcaniyeu, Las Heras, Camarones), mediante la técnica de PCR-SSCP. Se amplificó por PCR el fragmento hipervariable de la Región Control de estos animales mas el de los clones utilizados como patrón. Los productos de amplificación se corrieron en geles de poliacrilamida neutra al 10 % y la identificación de las diferentes conformaciones se determinó mediante teñido de los geles con AgNO3    y comparación con los haplotipos conocidos. Los haplotipos de referencia fueron observados en 116 de los 157 animales analizados. En los restantes encontramos alrededor de 7 patrones diferentes; la secuenciación de 2 de ellos permitió identificar un sexto haplotipo. El presente trabajo indica que la técnica de PCR-SSCP es un método rápido y confiable de tipificación preliminar de linajes mitocondriales en guanacos de la Patagonia. Posteriormente, la secuencia de estos haplotipos se utilizará como marcador molecular para complementar los datos de diversidad y diferenciación genética obtenidos con microsatélites STR en poblaciones de esta especie.