Optimización de modelos de cultivo in vitro para el estudio de desarrollo de E. granulosus

PRADA L; GUTIERREZ AM; CUCHER M; SPILIOTIS M; BREHM K; ROSENZVIT MC

Rosario, Argentina

Congreso; VIII Congreso de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2008

Sociedad Argentina de Protozoología

El estudio de los parásitos helmintos no ha alcanzado el desarrollo logrado en los parásitos unicelulares, debido en parte a la complejidad de sus ciclos de vida, difíciles de reproducir en el laboratorio, y a la falta de modelos in vitro apropiados. E. granulosus es un parásito helminto que existe como un conjunto de cepas adaptadas a hospedadores intermediarios particulares. El estadío larval de metacestode (quiste hidatídico) causa la hidatidosis humana. E. granulosus presenta particularidades como la capacidad dual del protoescolex (estadío larval pre-adulto) de desarrollarse hacia microquiste o al estadío adulto estrobilar. El objetivo de este trabajo fue optimizar los modelos in vitro de E. granulosus para estudiar factores involucrados en el desarrollo y supervivencia de las distintas cepas de E. granulosus. Se extrajeron protoescólices (PE) de quistes porcinos, ovinos y bovinos. Se determinó la cepa mediante secuenciación de un fragmento del gen mitocondrial CO1 y  se cultivaron por duplicado en las siguientes condiciones: 1)líquido hidatídico, 2)DMEM con 10% de suero fetal bovino (DMEM/S), 3)DMEM/S con líneas celulares de hepatocitos 4)DMEM/S con líneas celulares de fibroblastos y 5)DMEM/S con insulina. Se analizó el efecto en el tiempo de supervivencia y velocidad de desarrollo. La condición que permitió mayor supervivencia fue el co-cultivo con hepatocitos. En esta condición se observaron en mayor número formas tendientes a estrobilización, así como también PE vesicularizados, habiéndose detectado capa laminar incipiente en cepa oveja. Esto permitiría la comparación de ambas formas de manera simultánea en cuanto a la expresión de transportadores de metabolitos, factores de crecimiento y sus receptores.