Identificación y caracterización bioinformática de cisteín proteasas de Echinococcus granulosus

NAIDICH A; CAMICIA F; ROSENZVIT MC; GUTIERREZ AM

Buenos Aires

Congreso; III Congreso Latinoamericano de Zoonosis. VI Congreso Argentino de Zoonosis; 2008

Asociación Argentina de Zoonosis

IDENTIFICACION Y CARACTERIZACION BIOINFORMATICA DE CISTEÍN PROTEASAS DE ECHINOCOCCUS GRANULOSUS A. Naidich, F. Camicia, M. Rosenzvit, A. Gutierrez Departamento de Parasitología, Insituto Nacional de Enfermedades Infecciosas, ANLIS “Dr. Carlos G. Malbrán”. Ciudad de Buenos Aires. Argentina. Av. Velez Sarsfield 563 (CP1281) anaidich@anlis.gov.ar El agente causal de la hidatidosis es el cestode Echinococcus granulosus. Su ciclo de vida involucra a dos tipos de hospedadores, uno definitivo (perro) y otro intermediario (mamíferos ungulados). La enfermedad hidatídica se produce en el hombre por ingestión accidental de oncosferas y se caracteriza por el desarrollo de quistes, principalmente en hígado y pulmón (hidatidosis primaria). La rotura de estos quistes produce la liberación de los protoescolices contenidos en ellos, diseminándose y dando origen a nuevos quistes (hidatidosis secundaria). En varios parásitos se han identificado proteínas (cistín proteasas) con capacidad de degradar moléculas de los hospedadores, como inmunoglobulinas, albúmina y componentes de la matriz extracelular (colágeno y fibronectina). Las mismas pueden estar relacionadas con la evasión de respuesta inmune, invasión y penetración tisular en sus hospedadores. Es importante determinar el rol de estas proteasas en procesos como la formación de los quistes en hidatidosis secundarias, ya que son posibles blancos terapéuticos y profilácticos en intervenciones quirúrgicas. El propósito de este trabajo es identificar y caracterizar cisteín proteasas en el estadío larval de E. granulosus. Para esto, se obtuvo ARN de protoescólices provenientes de quistes porcinos mediante una extracción con TRIZOL, a partir del cual se realizó una RT-PCR para obtener ADNc. Este fue amplificado mediante el empleo de primers degenerados, diseñados en base a zonas conservadas del sitio activo de cisteín proteasas de eucariotas. Los fragmentos obtenidos se secuenciaron. El análisis “in silico” mostró fragmentos con identidad nucleotídica de un 94% con catepsina-L de E. multilocularis, 79% con catepsina-L de Fasciola hepatica y 73% con Taenia asiatica. La identidad de la secuencia aminoacídica deducida es de 92% y 52% con dos catepsinas-L de E. multilocularis y del 55% con una de T. solium. Se encontraron RNAm que posiblemente codifiquen cistein proteasas en E. granulosus. La alta identidad encontrada con respecto a otros parásitos sugiere que estos podrían categorizarse como proteinasas del tipo catepsina-L, cuya función puede estar involucrada en procesos de ruptura de matriz extracelular, en protoescolices. Los resultados obtenidos permiten diseñar herramientas más específicas para avanzar en la determinación de función bioquímica de estas proteasas y evaluar su potencial rol en la hidatidosis secundaria.