Identificación y análisis de variabilidad intraespecífica de proteínas de secreción y de membrana de Echinococcus granulosus

ROSENZVIT MC; KAMENETZKY L; GUTIERREZ AM; MUZULIN PM; GUARNERA EA; NAIDICH A; CAMICIA F

Rosario, Argentina

Congreso; XX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2004

Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias

BBM Identificación y análisis de variabilidad intraespecífica de proteínas de secreción y de membrana de Echinococcus granulosus. M. Rosenzvit, L. Kamenetzky, A. Gutierrez, P. Muzulín, E. Guarnera, A. Naidcih y F. Camicia. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. ANLIS “Dr. Carlos G. Malbrán”. marar@anlis.gov.ar   E. granulosus es un platelminto parásito de la clase Cestoda que causa la hidatidosis quística, una zoonosis endémica América del Sur. Debido al papel clave de las proteínas secretadas y de membrana (S/M) en la interacción del parásito con sus hospedadores, éstas son consideradas como candidatos obvios para la obtención de vacunas, reactivos de diagnóstico y quimioterapias. En este trabajo, se utilizó el método de atrapado de secuencias señal (SST) para identificar moléculas S/M en el estadio larval (protoescolex) de E. granulosus. A partir de una genoteca de ADN copia, se obtuvieron dieciocho clones positivos., confirmándose en la mayoría de ellos la presencia de secuencias señales mediante el programa Signal P. Seis de estos clones mostraron similitud con proteínas transportadoras de aminoácidos y de intermediarios del ciclo de Krebs. Uno con un EST de E. granulosus que es similar a una proteína secretada. Otro es similar a la presenilina, proteína involucrada en el mal de Alzheimer en su estado patológico y que desempeñaría un papel clave en la diferenciación celular. Siete clones no mostraron similitud significativa y dos resultaron idénticos a ESTs de E. granulosus pero en dirección opuesta. Se analizó mediante experimentos de RT-PCR la expresión de cada uno de estos genes a lo largo del ciclo de vida del parásito. Dos de los clones positivos han sido expresados en Escherichia coli y se han obtenido anticuerpos específicos en ratones que permitieron la detección de proteínas en homogenatos parasitarios mediante Western blot. Se ha estudiado la variabilidad intraespecífica de varios de estos cDNAs, mediante la técnica de SSCP-PCR, detectándose variabilidad entre las cepas oveja y camello, para varios de estos genes. Así mismo, se ha realizado el estudio de variabilidad de una molécula secretada, el Antígeno B, de importancia diagnóstica y funcional para el parásito. Se ha determinado que es significativamente variable dentro y entre cepas de E. granulosus. La mayor variabilidad se observa en el segundo exón, lo que sugiere que actúa presión de selección natural sobre este gen. Se han expresado las variantes del AgB de dos de las cepas que infectan humanos en Argentina para determinar su funcionamiento en el diagnóstico de la hidatidosis. Los resultados obtenidos sugieren que el antígeno B tiene importancia para la supervivencia del parásito en sus distintos hospedadores, y que su capacidad diagnóstica debe reevaluarse.