Detección de Culex Flavivirus (Flaviviridae) en mosquitos Culex bidens y Culex spp., capturados en Pampa del Indio, Chaco

ORNELLA S. STECHINA; GRISELDA I. ORIA; LUIS A. DIAZ; MARTA S. CONTIGIANI; MARINA STEIN

Mar del Plata

Jornada; X Jornadas Regionales sobre Mosquitos; 2016

Instituto de Investigaciones en Biodiversidad y Biotecnología - CONICET

Los virus del género Flavivirus (familia Flaviviridae) se clasifican en virus transmitidos por mosquitos (MBV), virus transmitidos por garrapatas (TBV), virus de vector desconocido (NKV) y flavivirus específicos de insectos (FSI). Los FSI se caracterizan por infectar de forma natural a los mosquitos y replicar en células de mosquitos in vitro, pero no parecen replicarse en las células de vertebrados o infectar a los seres humanos u otros vertebrados. Sin embargo, debido a que infectan las mismas especies de mosquitos que actúan como vectores de Dengue, West Nile, Saint Louis Encephalitis, y sumado a la relativa similitud genética, algunos estudios demostraron que mosquitos infectados con FSI podrían tener un potencial efecto modulatorio, suprimiendo o bloqueando la replicación de ciertos MBV o por el contrario mejorando la competencia vectorial y por lo tanto aumentando la trasmisión de MBV. Por tal motivo fue de nuestro interés conocer y caracterizar los FSI a partir de la secuenciación de un fragmento del gen NS5 obtenidos de mosquitos colectados en el Parque Provincial Pampa del Indio, provincia de Chaco. Los mosquitos fueron colectados desde diciembre del 2009 al 2011 con trampas tipo CDC y suplementadas con dióxido de carbono en el Parque Provincial Pampa del Indio, Chaco. Los mosquitos se conservaron a -70°C hasta su procesamiento. Los pooles se armaron por especie, sexo y fecha de colecta, entre 1 y 50 individuos por pool bajo platina refrigerada. La detección de Flavivirus se realizó utilizando la técnica RT-PCR Nested genérica amplificando una región de 143pb correspondiente a un fragmento del gen NS5 que codifica para la polimerasa viral. Todas las muestras positivas fueron secuenciadas, pero el análisis filogenético se realizó con tres de ellas denominadas PI183, PI190 y PI200, las demás secuencias (5) no pudieron ser utilizadas por ser de baja calidad. Las secuencias PI183, PI190 y PI200 fueron comparadas con secuencias de Flavivirus de Insectos citadas para Argentina y otras secuencias representativas de estos virus obtenidas de la base de datos pública (GenBank). Para mantener el marco de lectura correcto, las secuencias fueron alineadas con ClustalW y se utilizó el método de Neighbour Joining (NJ) basado en matrices de distancia entre taxones (Bootstrap=1000) para obtener un árbol, utilizando el software MEGA versión 4.0.Se procesaron 78 pooles (901 mosquitos) correspondientes a 26 especies. Ocho pooles resultaron positivos para Flavivirus y corresponden a las especies Culex bidens (3 pooles), Culex spp. (4 pooles) y Mansonia spp. (1 pool). El análisis por distancia de las 3 secuencias obtenidas en mosquitos Culex spp. (PI183 y PI200) y Culex bidens (PI190) fueron agrupadas con Flavivirus de Insectos, en particular con Culex Flavivirus (CxFV). Sin embargo no fue posible llevar a cabo un análisis filogenético más detallado debido a la pequeña longitud del fragmento amplificado y secuenciado. Se necesitan más estudios que permitan secuenciar regiones mayores del genoma del virus y/o pruebas experimentales con infecciones en mosquitos, y de ésta manera aportar más información sobre la relación de estos FSI con los mosquitos y su posible participación en los procesos de transmisión de otros virus como los MBV.