Actividad antifúngica fotosensibilizante de extractos de Tagetes patula frente a levaduras causantes de candidiasis orofaríngeas

CALLIGARIS, G.; POSTIGO, A.; LEONARDI, D.; ZACCHINO S; SORTINO, M.

Rosario

Jornada; IX Jornadas de Ciencia y Tecnología; 2015

La Candidiasis Orofaríngea (CO) es una infección frecuente en pacientes con mala nutrición, trastornos metabólicos, VIH o asociada al uso de prótesis removibles, entre otros; que causa la inflamación de la mucosa oral, dolor y disgeusia y constituye una factor de riesgo de diseminación de Candida. La Quimioterapia Fotodinámica Antimicrobiana (QTFA) es una alternativa terapéutica para el tratamiento de infecciones fúngica que posee ventajas como amplio espectro de acción, baja probabilidad de generación de cepas fotorresistentes, mínimo daño a tejidos hospederos, etc. La QTFA utiliza moléculas fotosensibilizantes (FS) y luz de una determinada longitud de onda para inducir un daño oxidativo en patógenos microbianos. Algunas plantas producen, como protección frente a patógenos y predadores, moléculas FS que, al ser excitadas por luz de una determinada longitud de onda, ejercen efectos tóxicos sobre biomoléculas y células, destruyéndolas. Con el objetivo de detectar y aislar nuevos compuestos FS a partir de fuentes naturales, se evaluó la actividad antifúngica FS de Tagetes patula L. (Asteraceae) conocida vulgarmente como ?copete? o ?clavel chino? frente a levaduras aisladas de pacientes con CO. Se realizaron extractos hexánico, diclorometánico, de acetato de etilo y metanólico, por maceración de raíces y partes aéreas (tallo, hojas y flores) de T. patula. La actividad se evaluó por el método M27-A3 de CLSI frente a dos cepas de C. albicans (Ca1 y Ca2), C. glabrata (Cg), C. krusei (Ck), C. parapsilosis (Cp) y C. tropicalis (Ct). Se utilizaron microplacas de 96 pocillos en las que se realizaron diluciones sucesivas al medio de los extractos a los que posteriormente se incorporaron inóculos de los microorganismos a una concentración de 5x103 UFC/mL. La metodología fue modificada para detectar actividad antifúngica FS, realizándose en paralelo en dos microplacas, una de las cuales se irradió durante 1 h con luz UV-A (350-410 nm), mientras que la otra, permaneció en oscuridad. Posteriormente, se realizaron recuentos tomando alícuotas de cada pocillo de las microplacas, las cuales se sembraron en placas de Agar-Sabouraud Glucosa, se incubaron a 28 ºC por 48 h y se determinaron las UFC/mL. Para cada combinación extracto/hongo, se determinó la Concentración Fungicida Mínima (CFM), mínima concentración del extracto que producía la muerte de la totalidad de los microrganismos. No se observó actividad antifúngica (CFM >1000 µg/mL) en los extractos de acetato de etilo y metanólico de raíces y en los extractos obtenidos de partes aéreas, tanto en las placas irradiadas como aquellas que permanecieron en oscuridad. Los extractos hexánico y diclorometánico obtenidos de raíces demostraron actividad antifúngica, frente a todas las cepas de Candida evaluadas, sólo cuando fueron irradiados, mientras que fueron inactivos en oscuridad. Los valores de CFM observados para el extracto hexánico fueron: 3,90 µg/mL frente a Ca1 y Ca2; y 7,80 µg/mL frente Cg, Ck, Cp y Ct. El extracto diclorometánico demostró poseer menor actividad con CFMs de 7,80 µg/mL frente a Ct; 15,63 µg/mL frente a Ca2 y Cg; 31,25 µg/mL frente a Ck y Cp y 62,5 µg/mL frente a Ca1. Estos datos proporcionan evidencia de que los extractos menos polares de T. patula bajo irradiación con luz UV-A podrían constituir una alternativa interesante para los tratamientos de CO utilizando QTFA.