Actividad antifúngica fotosensibilizante de Porophyllum obscurum: producción de especies reactivas de oxígeno e inhibición de factores de virulencia

POSTIGO, A.,; PETENATTI, E.; PACCIARONI, A.; BOTTAI, H.; ZACCHINO, S.; SORTINO, M.

Córdoba

Congreso; INFOCUS 2015; 2015

La Quimioterapia Fotodinámica Antimicrobiana (QTFA) es una alternativa terapéutica para el tratamiento de micosis que utiliza moléculas fotosensibilizantes (FS) y luz para producir especies reactivas de oxígeno (EROs) que destruyen patógenos microbianos pudiendo afectar a factores de virulencia de Candida albicans tales como la capacidad de adherencia a células epiteliales y la formación de tubos germinativos.Es sabido que algunas plantas producen FS como protección frente a patógenos y predadores. Dentro de un proyecto de búsqueda de FS naturales no tóxicos, estudiamos Porophyllum obscurum (Spreng) DC., cuyo extracto hexánico (PoHex) había demostrado poseer una importante actividad antifúngica [Concentración Fungicida Mínima (CFM) = 0,98µg/mL] bajo irradiación con luz UV-A.Para profundizar este estudio, los objetivos del presente trabajo fueron:-evaluar si el efecto antifúngico observado se debe a un incremento de la producción de EROs: peróxido de hidrógeno (H2O2), anión superóxido (O2·-) y oxígeno singlete (1O2)-analizar si la acción de FS y luz influye sobre la producción los factores de virulencia de C. albicans: adherencia y formación de tubo germinativoLa producción de H2O2 se determinó colorimétricamente a 505 nm por la generación de una quinona coloreada por reacción con fenol y 4-aminofenazona en presencia de peroxidasa. La producción de O2·- se midió indirectamente por la reducción de Nitro Blue Tetrazolium (NBT) a 575 nm. La producción de 1O2 se midió a través de un ensayo indirecto por la descomposición de 1,3-difenilisobenzofurano (DFBF). La adherencia se evaluó por microscopía óptica cuantificando el número de levaduras adheridas a 100 células epiteliales. La formación de tubo germinativo se realizó por incubación de las levaduras durante 2 h a 37 ºC y posterior observación por microscopía confocal con blanco de calcoflúor. En todos los casos se compararon los resultados obtenidos en presencia de FS y luz (F+L+) con controles [FS sin luz (F+L-), luz sin FS (F-L+) y sin tratamiento (F-L-)] empleando métodos estadísticos adecuados.Los resultados mostraron que:- PoHex (F+L+) generaba H2O2, O2·- y 1O2 en niveles significativamente superiores (p