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Las plantas proveen oportunidades ilimitadas para el aislamiento de nuevos compuestos antifúngicos por su gran disponibilidad de estructuras químicas novedosas (1,2). La mayoría de los trabajos de búsqueda de antifúngicos a partir de plantas se basa en la inhibición del crecimiento fúngico por el extracto y el posterior aislamiento de los compuestos responsables de la actividad. En este trabajo, en cambio, usamos un ensayo de alta eficiencia (HTSS) basado en la inhibición del crecimiento fúngico de extractos no cuando actúan solos, sino en combinación con un antifúngico comercial, ambos a dosis inferiores a las inhibitorias (3). Objetivos Detectar compuestos en extractos de plantas que, en combinación con fluconazol, muestren mayor actividad antifúngica que la ejercida por cada uno por separado. Resultados, discusión y conclusiones De entre los extractos probados, el extracto DCM de partes aéreas de Zuccagnia punctata, en combinación con fluconazol, mostró inhibición del crecimiento de Candida tropicalis. El fraccionamiento del extracto activo permitió aislar 7-hidroxi-8-metoxiflavanona como la responsable de la actividad encontrada para el extracto. Los resultados mostraron que la CIM del fluconazol frente a C. tropicalis disminuyó de 16 a 8 mg/mL en presencia de 125 mg/mL de la flavanona, mientras que la CIM de la flavanona en solitario era de 1000 mg/mL. El tipo de interacción entre ambos (sinergismo, aditivismo o antagonismo) se determinó a través del método del tablero de ajedrez, lo que mostró que ambos actuaban en forma aditiva con un Índice de Concentración Inhibitoria fraccionada (ICIF) =0,625. Materiales y métodos Preparación del extracto Z. punctata fue recolectada en Ayacucho, San Luis (Argentina) y depositada en el Herbario de la UNSL (Del Vitto & Petenatti #9230). Partes aéreas secas se extrajeron sucesivamente con Hex, DCM y MeOH. Por cromatografía en columna (SiGel 60H) se obtuvieron 13 fracciones a partir del extracto DCM, las que fueron ensayadas con el HTSS. De una de las fracciones activas se aisló 7-hidroxi-8metoxiflavanona como la responsable de la actividad en combinación. Determinación de CIM en solitario y en combinación Para determinar la CIM de cada uno de los compuestos se utilizó el método de microdilución en caldo recomendado por el Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) para levaduras (4) utilizando la cepa C. tropicalis CEREMIC C132-2000. Para la prueba en combinación, en sendos pocillos de la microplaca, por duplicado se colocó: (i) fluconazol a concentración inhibitoria; (ii) fluconazol a concentración no inhibitoria; (iii) compuesto a concentración no inhibitoria; (iv) una combinación de (ii) y (iii) (4). A cada pocillo se le agregó un inóculo cuantificado del hongo. Determinación del tipo de interacción Se determinó usando el método tablero de ajedrez (5). Las Concentraciones Inhibitorias Fraccionarias del fluconazol (CIFFluco) y del compuesto (CIFC) se determinaron como (CIMcombinado/CIMsolo). El ICIF se calculó como (CIFfluco+CIFC). Interpretación: ICIF≤0,5: sinergismo; 0,5< ICIF< 4: aditivismo; ICIF >4: antagonismo.

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