Efecto de la terapia fotodinámica sobre la viabilidad de biopelículas de hongos levaduriformes provenientes de lesiones mucosas

RAMADÁN S;; BULACIO L; ; DALMASO H; ; LUQUE A; ; CENSI A; ; STERPO A,; SORTINO M.

Congreso; XXI Congreso y la XXXIX Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario.; 2019

Las levaduras del género Candida son constituyentes de la microbiota habitual de piel y mucosas del ser humano. No obstante las candidiasis superficiales son enfermedades infecciosas que pueden afectar a personas de todas las edades. Entre los factores que predisponen al desarrollo de estos cuadros, se encuentran descriptos aquellos que son propios del hospedero, entre los que se pueden mencionar situaciones fisiológicas como edades extremas o embarazos, así como patologías coexistentes. Un segundo grupo de factores que facilitan la colonización y desarrollo de candidiasis, se relaciona con factores propios de estos hongos levaduriformes, como son la producción de enzimas hidrolíticas, capacidad de adherencia y producción de biopelículas. Éstas últimas les confieren a las levaduras, una mayor resistencia a los tratamientos habituales dado que por su estructura, entre otros efectos impiden la correcta llegada de las drogas a todas las células que la integran. El objetivo de este trabajo fue analizar el efecto de la terapia fotodinámica en la viabilidad de biopelículas producidas por hongos del género Candida. Se trabajó con 52 cepas registradas en la colección de cultivos del CEREMIC, provenientes de localizaciones mucosas: Candida albicans (N=30), Candida tropicalis (N=12), Candida parapsilosis (N=9) y Candida krusei (N=1). A los aislamientos se les evaluó la capacidad de producción de biopelícula en microplaca de 96 pocillos durante 48h, seguida de lavado y coloración con cristal violeta con posterior lectura de densidad óptica. Luego se realizó el análisis de susceptibilidad a terapia antifúngica fotosensitiva de las células planctónicas y de las biopelículas, sometiendo a las mismas, a tratamiento con azul de ortotoluidina (rango de concentración 0,03 a 1000 μg/ml), irradiando con luz de LED de 20 W. La viabilidad de la biopelícula luego de la irradiación se evaluó por subcultivo de una alícuota de 10 μl en placa de Agar Sabouraud glucosa. De las 52 cepas estudiadas, 18 no presentaron la capacidad de producción de biopelículas (13 C. albicans, 3 de C. tropicalis, 1 de C. parapsilosis y el aislamiento de C. krusei), en tanto las 34 restantes fueron productoras de las mismas (17 C. albicans, 9 C. tropicalis y 8 C. parapsilosis). Las células planctónicas de los 52 aislamientos fueron sensibles al tratamiento fotodinámico, con concentraciones inhibitorias mínimas (CIMs) en el rango de 0,24 a 7,8 μg/ml luego de una hora de irradiación. En cuanto a las biopelículas generadas por las cepas estudiadas, solo dos aislamientos, ambos de C. tropicalis, tuvieron CIMs > 1000 μg/ml, por lo que, aunque no hay valores de corte armonizados para estimación de resistencia/sensibilidad, fueron considerados como aislamientos de sensibilidad disminuida. Las otras cepas mostraron disminución de la viabilidad de las biopelículas, con CIMs en el rango de 0,03 a 250 μg/ml. Siendo la radiación LED una emisión de baja potencia, se la puede considerar no invasiva, y la luz emitida por el sistema colorante-radiación provoca una cascada de respuestas biológicas que transforman estructuras celulares debido al efecto de radicales libres generados en la reacción, que causan severos daños en las biomoléculas como ácidos nucleicos, proteínas, etc. Por ello podemos considerar a la terapia fotodinámica como una estrategia promisoria, especialmente en los casos en que los tratamientos habituales fracasan o cuando, por las características de los pacientes, están contraindicados.