Evaluación de los efectos genotóxicos mediante un ensayo de desnaturalización alcalina en un pez neotropical usando metil metano sulfonato (MMS) como un químico modelo

DE SAN BENITO, E.; GONZALEZ, P.V.; QUELAS, J.I.; CARRIQUIRIBORDE, P.

Córdoba

Congreso; VI Congreso SETAC Argentina; 2016

SETAC Argentina

En el presente trabajo se evaluó el desempeño de un micrométodo para evaluar genotoxicidad, de cadena simple (SSB) y doble (DBS), mediante la cinética de desnaturalización del AND medida por florescencia (μ-FADU). La técnica se puso a punto mediante ensayos ?in vitro? e ?in vivo? utilizando al pez Cnesterodon decemmaculatus. ?In vitro? la ruptura del ADN fue generada por digestión enzimática mediante el uso de una endonucleasa I luego de su extracción por el método de fenol cloroformo del músculo esquelético de un grupo de organismos control. Luego, en los experimentos ?in vivo? el ADN se extrajo mediante el mismo método y tejido, de un grupo de pece expuesto durante 24h diferentes concentraciones de MMS (metil-metano-sulfonato), utilizado como agente genotóxico de referencia, y comparado contra un grupo control. El ensayo utiliza Sybr Green I como fluorocromo y solución tampón pH 12,2 para seguir la cinética de desnaturalización del DNA mediante un lector de microplacas de fluorescencia. El punto final evaluado fue el factor de escisión (SSF). Una buena correlación se observó entre le SSF y el tiempo de tratamiento con la endocnucleasa hasta la media hora de reacción. El método también resultó sensible en el ensayo in vivo mostrando una buena correspondencia entre la concentración de MMS ensayada y el SSF, incrementando su valor 3,6 veces entre los controles y los peces expuestos a 15 mg/L de MMS. Por otra parte la menor concertación del tóxico de referencia que generó una respuesta significativa fue de 3,7 mg/L. En conclusión el método evaluado ha resultado sensible, confiable y rápido para evaluar genotoxicidad en peces. PICT2014-1690.