Regulación dinámica del volumen celular y del ATP extracelular en eritrocitos humanos

LEAL DENIS MARÍA FLORENCIA; LAURI, NATALIA; ALVAREZ, CORA LILIA; SCHWARZBAUM PABLO JULIO

La Plata

Congreso; REUNIÓN ANUAL DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE FISIOLOGÍA; 2016

SOCIEDAD ARGENTINA DE FISIOLOGÍA

El péptido mastoparán 7 (MST7) induce la salida de ATP en eritrocitos humanos y un aumento del volumen celular (Vr). Se sabe que el aumento de Vr (swelling) es un inductor de la salida de ATP y que el ATP extracelular (ATPe), activando receptores P (de nucleótidos purínicos y pirimidínicos), puede afectar el Vr. Entonces, analizamos la regulación dinámica y recíproca entre Vr y ATPe en eritrocitos humanos.Para ello se expusieron los eritrocitos a MST7, y se estudiaron las cinéticas de Vr y de concentración de ATPe ([ATPe]), en presencia de moduladores de la salida de ATP, de Vr y de receptores P.Los resultados muestran que en eritrocitos humanos el MST7 promueve un aumento agudo en la [ATPe] y en Vr, fuertemente correlacionados. Mientras el MST7 induce un aumento de 10% en Vr y de 190 nM en la [ATPe], el bloqueo del swelling con MST7 en medio hiperosmótico redujo la [ATPe] en un 40%. El pre-tratamiento de las células con carbenoxolona o probenecid (bloqueantes de panexina 1, vía de salida de ATP) redujo la [ATPe] en un 40-50% y el swelling un 40-60%, mientras que el tratamiento con apirasa (removedor de ATPe) bloqueó el swelling. Entonces se postuló que el ATPe afecta el Vr al activar receptores P2X que median la entrada neta de sodio a las células, induciendo un aumento de la osmolaridad intracelular. Efectivamente, en células expuestas a MST7, 1- la pre-incubación con NF110, inhibidor de receptores P2X que median la entrada de sodio, redujo un 48% la [ATPe] y un 80% el swelling; 2- el reemplazo del sodio por cloruro de colina en el medio de ensayo redujo un 92% el swelling; 3- el contenido intracelular de sodio aumentó un 60%.Los resultados sugieren que la exposición MST7 induce la salida de ATP por dos vías, una de las cuales sería la panexina 1. El ATPe acumulado activa receptores P2X, que permiten la entrada de sodio, llevando a un aumento de Vr que a su vez activa la salida de ATP. Por lo tanto el swelling y los receptores P2X constituyen componentes esenciales de un circuito de retroalimentación positiva que media la liberación de ATP inducida por ATPe de eritrocitos humanos.