REGULACIÓN DINÁMICA DE ATP EXTRACELULAR EN ESCHERICHIA COLI

CORA L. ÁLVAREZ; NATALIA LAURI; GERARDO CORRADI; ELIANA DUARTE; MARIANA SACERDOTI; LUCIANO NIEVEZ; MARÍA VICTORIA ESPELT; MARÍA FLORENCIA LEAL DENIS; VANESA HERLAX; PABLO JULIO SCHWARBAUM

Mar del Plata

Congreso; Reunión Conjunta SAIC.SAFIS 2015; 2015

E. coli es el principal anaerobio facultativo del sistema digestivo. De acuerdo al contexto fisiológico del huésped, este organismo puede captar ATP exógeno, siendo metabolizado por nucleotidasas en el periplasma, o liberar ATP del periplasma al medio extracelular. In vitro la regulación de ATP extracelular (ATPe) de E. coli depende del balance entre la liberación de ATP y la hidrólisis de ATPe por nucleotidasas.Se estudió la regulación de ATP extracelular (ATPe) de suspensiones de E. coli DH5α (2x109cél/ml) a 20 °C.Hidrólisis de ATPe: se evaluó en suspensiones mediante la liberación de [32P]Pi a partir de [γ32P]ATP. En medios con fosfato (M9), a 100-1000 nM ATP, la acumulación de Pi fue lineal en el tiempo y la actividad ATPasica (vi) fue proporcional a la [ATPe]. A 600 nM y 500 µM ATPe vi fue 2,77-19,26 veces superior en un medio sin fosfato (hepes) que en M9. En ambos medios a 600 nM vi fue inhibida 28 % por suramina y 71 % por el análogo de ATP (AMP-CPP).Liberación de ATP: se evaluó en suspensiones mediante la cuantificación de la [ATPe] por luminiscencia. En ausencia de estimulo, la [ATPe] fue 202 ± nM/108 cels. La exposición a 10 µM del péptido mastoparan 7 no afectó la viabilidad, e indujo un aumento de 414 veces en la liberación de ATP, alcanzándose una [ATPe] de 1010 ± nM/108 cels (n= 13). La incubación con el péptido melitina produjo liberación de ATP dependiente de la dosis, tanto en ausencia como en presencia de lisis.En conclusión, en suspensiones bacterianas, y en ausencia de lisis, se verificó:- actividad ATPasica en un amplio rango de concentraciones. En medios sin fosfato, Vi fue mayor. Esto es compatible con la existencia de dos nucleotidasas, una de las cuales es inhibida por fosfato.- liberación de ATP. Con mastoparan 7 esta liberación es 400 veces superior a la actividad ATPasica. Por lo tanto, la evolución temporal de acumulación de ATPe refleja el perfil cinético de liberación de ATP.