Influencia de la mutación natural D240G en el perfil de resistencia conferido por cefotaximasas pertenecientes al grupo CTX-M-1

GHIGLIONE BÁRBARA; DI CONZA JOSÉ; RADICE MARCELA; RODRIGUEZ MARGARITA; POWER PABLO; GUTKIND GABRIEL

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología.; 2010

Asociación Argentina de Microbiología

Introducción: A diferencia de otras ß-lactamasas de espectro extendido (BLEE), las cefotaximasas hidrolizan ceftazidima de manera menos efectiva que otras enzimas de espectro extendido (TEM, SHV o PER, por ejemplo). Varias sustituciones aminoacídicas en las ß-lactamasas de tipo CTX-M se han propuesto como responsables del aumento en la tasa de hidrólisis frente a ceftazidima (ej.: D240G), denominando “ceftazidimasas”.Objetivos: El objetivo de este trabajo fue evaluar el papel de la mutación D240G en el perfil de resistencia de las mutantes naturales CTX-M-15 y CTX-M-96, frente a sus respectivas enzimas parentales CTX-M-3 y CTX-M-12.Materiales y Métodos: Los genes codificantes de las ß-lactamasas fueron amplificados por PCR a partir de aislamientos salvajes, clonados en pK19 y transformados en E. coli DH5a. Las construcciones obtenidas fueron verificadas por secuenciación. El “screening” de BLEE y los ensayos de susceptibilidad fueron realizados por difusión y dilución según recomendaciones del CLSI.Resultados: Se obtuvieron clones portadores de los genes parentales blaCTX-M-3 y blaCTX-M-12 y de sus respectivas mutantes naturales blaCTX-M-15 y  blaCTX-M-96, todos en un mismo entorno genético y con idéntico péptido señal. Se observó sinergia con ácido clavulánico en todos los clones recombinantes obtenidos. Los clones productores de CTX-M-15 y CTX-M-96 mostraron valores de CIM a ceftazidima 8 veces mayores que sus respectivos clones productores de CTX-M-3 y CTX-M-12, si bien los valores de CIM no superaron a aquellos obtenidos para cefotaxima. No se observó diferencia en los valores de CIM frente a cefotaxima en los clones analizados.Conclusiones: Aunque la mutación D240G lleva a un aumento en los valores de CIM frente a ceftazidima en cepas productoras, el incremento en la afinidad de las variantes enzimáticas por dicho antibiótico debería ser confirmado por estudios cinéticos. Dado que los valores de CIM a cefotaxima fueron al menos 8 veces mayores que los correspondientes a ceftazidima, el término “ceftazidimasas” acuñado actualmente para estas nuevas variantes de CTX-M debería ser aplicado cuidadosamente y posiblemente reservado solo para aquellas variantes (de existir) en las que la cinética de hidrólisis de ceftazidima y cefotaxima sean al menos equivalentes.