Análisis genético de determinantes Qnr en enterobacterias resistentes a cefalosporinas de tercera generación.

PORTO AYELEN; ESCOBAR ANALIA; JORIS ROMINA; TRUPPIA LUIS; GUTKIND GABRIEL; DI CONZA JOSÉ

Mar del Plata, Argentina

Congreso; Congreso Argentino de Infectología – SADI 2010; 2010

Sociedad Argentina de Infectología

Entre los mecanismos de resistencia a quinolonas mediados por plásmidos, es de creciente interés mundial el análisis de los determinantes qnrA, qnrB y qnrS, y de las diversas variantes alélicas. Los genes qnr se encuentran localizados generalmente en plásmidos transmisibles por conjugación y frecuentemente asociados a integrones clase 1 y a transposones, lo cual favorece su diseminación.El objetivo de este trabajo fue investigar la presencia y prevalencia de los genes qnr en 30 enterobacterias aisladas consecutivamente en el Sanatorio Diagnóstico de la ciudad de Santa Fe en el año 2007. Con conocimiento de la frecuente asociación a otros mecanismos, se seleccionaron los microorganismos resistentes a quinolonas y/o fluorquinolonas, que expresaban en forma simultánea resistencia a cefalosporinas de tercera generación.Para estudiar la presencia de los genes qnrA, qnrB y qnrS se amplificó un fragmento interno mediante PCR, siguiendo condiciones ya descriptas y utilizando controles positivos específicos. En el 13% (4/30) de los aislamientos fue obtenido el amplicón esperado para el gen qnrB (2 Enterobacter cloacae y 2 Klebsiella pneumoniae). Ningún aislamiento mostró la presencia de qnrA ni qnrS.El análisis de la susceptibilidad a antibióticos se realizó siguiendo las recomendaciones del CLSI. Cabe destacar que los 4 aislamientos qnrB positivos mostraron alto nivel de resistencia a quinolonas (NAL>1024 µg/ml, CIP = 64-512 µg/ml) y fenotípicamente todos ellos exhibieron la presencia de ß-lactamasa  de espectro extendido.Se realizaron extracciones de plásmidos de las enterobacterias qnrB positivas y se utilizó como DNA molde para la amplificación por PCR del gen intI1 (codificante para la integrasa clase 1) y de regiones características de los integrones clase 1 inusuales;  pudo comprobarse en todos los casos que qnrB se encontraba asociado a, al menos, un integrón clase 1 inusual.Con el objeto de confirmar la identidad, los amplicones qnrB obtenidos (264 bp) fueron secuenciados y posteriormente comparados con las secuencias depositadas en bases de datos. En 3 casos se obtuvo alta homología para los alelos qnrB10/qnrB6, ya descriptos en Argentina, y mediante PCR fueron coligados al gen blaPER-2. El aislamiento restante mostró homología con qnrB2/qnrB20 y el mismo fue asociado al gen blaCTX-M-2.