Recuperación de enterobacterias a partir de dos métodos de conservación: Preservación de la estabilidad genética de las mismas.

TAVANO ALDANA; RICO MARINA; DI CONZA JOSÉ

Santa Fe

Encuentro; XIV encuentro de Jovenes Investigadores de la UNL; 2010

UNL - UTN- UCSF

El Laboratorio de Microbiología General de la Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional del Litoral cuenta con una importante Colección de Microorganismos destinados a proyectos de investigación desarrollados por la cátedra. Resulta pertinente el empleo de técnicas que permitan un correcto mantenimiento y preservación de los microorganismos, a fin de mantener y disponer para su utilización a lo largo del tiempo, todas las cepas viables, sin cambios en su genotipo.El objetivo del trabajo fue evaluar la viabilidad y estabilidad genética de diferentes géneros de enterobacterias portadores de integrones clase 1 y/o 2, conservados en agar cepa a 4ºC y en glicerol 20% a -20ºC, presentes en la colección de dicha cátedra.Materiales y MétodosSe estudiaron 32 enterobacterias portadoras de integrones clase 1 y/o clase 2, conservadas en el año 2005, a las cuales se les había evaluado el antibiotipo, la presencia de integrones de clases 1 y 2, y analizado la posible asociación entre estos elementos genéticos y el perfil de susceptibilidad a antibióticos.Se reactivaron cepas conservadas por dos métodos; agar cepa a 4ºC (n= 19) y congelación a -20ºC (n= 13) en glicerol al 20%. Se consideraron viables cuando se observó crecimiento típico, confirmándose su identidad mediante pruebas bioquímicas de identificación convencionales.Se determinó la susceptibilidad a distintos antibióticos según el método de difusión (KIRBY BAUER), siguiendo las normas del CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute).La persistencia de integrones clase 1 y 2 se confirmó mediante amplificación por PCR de un fragmento interno de las integrasas inti1 e inti2 respectivamente.ResultadosPor el método de agar cepa a 4ºC se recuperó el 58% (11/19) de los conservados, mientras que por glicerol 20% a -20ºC se obtuvo un 62% (8/13) de supervivencia. Si bien con la congelación se obtienen mejores resultados, la diferencia con respecto al agar cepa no es significativa (test chi, p: 0,8367). Se lograron recuperar en total 19/32 aislamientos (60%), coincidiendo su identificación con las especies esperadas.En 6/19 aislamientos (32%) no se observaron cambios en los perfiles de susceptibilidad, todos provenientes de conservados en agar cepa. En sólo 7/19 aislamientos analizados (37%) no pudo detectarse la presencia de integrones, 3 de ellos preservados en glicerol a -20ºC y los restantes en agar cepa a 4ºC. En el 54% de los aislamientos con diferencias en los antibiogramas respecto de los datos del 2005, no se observó la presencia de integrones; mientras que en el 46% que mostró diferencias, pudo amplificarse el gen de la integrasa correspondiente.Se concluye que tanto la conservación en agar cepa a 4ºC como en glicerol 20% a -20ºC resultaron eficaces a la hora de conservar enterobacterias por un periodo de 4 años, obteniéndose una recuperación del 60%. Si bien se observó un alto porcentaje de aislamientos que conservaron el/los integron/es, los perfiles de susceptibilidad detectados fueron menos estables.Cabe resaltar que ambas técnicas son sencillas, de rápido acceso y económicas, además no requieren de un equipamiento sofisticado, pudiendo ser empleadas en laboratorios de microbiología de baja complejidad.