Método de colistin agar spot e inhibición con EDTA para la detección de Escherchia coli portadora de mcr-1.

GONZALES ESCALANTE, EDGAR; DI CONZA JOSÉ; GUTKIND GABRIEL

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología - CAM 2019; 2019

La colistina es considerada un antibiótico de última línea para el tratamiento de infecciones por gram negativos multirresistentes. Si bien ya era conocida la resistencia cromosómica obtenida por mutaciones en genes que participan o regulan la síntesis del lípido A, en 2015, aparecieron los primeros informes sobre resistencia a colistina mediada por plásmidos, codificados por el gen mcr-1 (Mobile Colistin Resistance).Como la enzima MCR depende de zinc para su actividad, la quelación de este ion podría inhibirla. De ello se postula que las pruebas de inhibición con EDTA podrían ser útiles para su detección. En este estudio, evaluamos un ensayo basado en el método de screening Colistin Agar-Spot y la inhibición de la actividad de mcr-1 mediante EDTA.Se analizaron 54 aislamientos de enterobacterias: {Escherichia coli} resistentes a colistina portador de mcr-1 (n=30), {Klebsiella pneumoniae} resistente a colistina carente de mcr-1 (n=8) y {E. coli} sensibles a colistina (n=15); los aislamientos fueron recuperados de humanos y animales. Se incluyeron {Serratia marcescens} con resistencia natural a colistina (n=1) y {E. coli} ATCC 25922. El ensayo de screening Colistin Agar-Spot (Placa A: Mueller-Hinton con 3μg/ml de colistina) se realizó siguiendo las recomendaciones del servicio de antimicrobianos INEI ANLIS ?Dr. Carlos G. Malbrán?; además, se preparó una placa adicional de Colistin Agar-Spot a la que se le agregó una concentración final de EDTA de 1 mM, (Placa B: Mueller-Hinton con colistina 3μg/ml + EDTA 1mM). Se utilizó una placa de Mueller-Hinton con EDTA como control de crecimiento (Placa C: Mueller-Hinton con EDTA 1mM). Se evaluó el desarrollo de colonias sobre las placas luego de 18h de incubación a 35°C. Todos los aislamientos resistentes a colistina mostraron desarrollo de más de 1 colonia en las placas de Colistin Agar-Spot (Placa A); a su vez, las {K. pneumoniae} resistente a colistina sin mcr-1 y {S. marcescens}, mostraron desarrollo de colonias en la placa B mientras que en las {E. coli} resistentes a colistina productoras de MCR-1, no desarrollaron en las placas de Colistin Agar-Spot suplementado con EDTA (placa B). Como era de esperar, las {E. coli} sensibles a colistina no mostraron desarrollo en ninguna de las placas con colistina. En las placas de Mueller-Hinton con EDTA (Placa C) desarrollaron todas las bacterias analizadas. Este ensayo combinado (placa A + B) mostró 100% de sensibilidad y especificidad para la detección de {E. coli} productoras de MCR-1.En conclusión, nuestros resultados sugieren que los ensayos de Colistin Agar-Spot suplementado con EDTA comparándolo al método de screening Colistin Agar-Spot podría proporcionar un método simple y de fácil interpretación para diferenciar {E. coli} productora de MCR-1 de aquellos microorganismos resistentes colistina por otros mecanismos. Sin embargo, son necesarios estudios adicionales con un mayor número de aislamientos para confirmar la precisión de esta metodología.