Predicción de resistencia a colistina por MCR-1 en Escherichia coli usando MALDI-TOF MS.

FIGUEROA ESPINOSA ROQUE A; COSTA, AGUSTINA; GONZALES EDGAR; VAY CARLOS; GUTKIND GABRIEL; DI CONZA JOSÉ

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología - CAM 2019; 2019

Asociación Argentina de Microbiología

IntroducciónLa colistina ha resurgido como un antibiótico de última línea en el tratamiento de infecciones causadas por bacterias resistentes a carbapenemes. En el 2015 se describió el primer caso de resistencia plasmídica a colistina ({mcr-1}). La rápida detección de este mecanismo es crítico para el manejo de pacientes. Hoy día se emplean métodos fenotípicos que requieren 24 horas de incubación adicionales, posterior al aislamiento de la bacteria. En este trabajo nos propusimos buscar biomarcadores usando MALDI-TOF MS para predecir la resistencia a colistina por el gen {mcr-1} mediante el análisis visual de los espectros en el rango de identificación. Materiales y Métodos: Se compararon espectros de proteínas de 48 aislamientos clínicos de {E. coli} caracterizados previamente. Un grupo con {mcr-1} (17) y otro sensibles a colistina (31): {bla}_KPC-2 positiva (3), productores de BLEE (14) y portadores de otros tipos de genes de resistencia (14). Como control positivo se usaron dos cepas transconjugantes que portan el gen de resistencia {mcr-1}. La adquisición de los espectros se realizó mediante el sistema MALDI Biotyper en el equipo MALDI-TOF MS LT, con la matriz HCCA en el rango de 2 a 20 KDa, partiendo de colonia posterior a extracción de proteínas. Se usó el programa flexAnalysis para el análisis visual de los espectros y ClinProTools 3.0 para identificar posibles biomarcadores de resistencia. Se realizó un análisis de secuencias de 10 plásmidos que portan {mcr-1} de Argentina empleando herramientas bioinformáticas disponibles on line.Resultados Al realizar la comparación visual de los espectros entre las cepas transconjugantes y su receptoras, se identificó un pico de c.a. {m/z} 6650 Da únicamente en las cepas resistentes a colistina. Este pico está presente en los espectros de los aislamientos salvajes de {E. coli} productores de MCR-1, y ausente en las cepas sensibles a colistina (MCR-1 negativas). Obteniendo 100% de sensibilidad y 95% de especificidad y un valor de área bajo la curva de 0.98. Del análisis comparativo de plásmidos se encontró un gen ({ycfA}) que codifica una proteína del sistema Toxina-Antitoxina con peso molecular teórico de 6648 Da en todos los plásmidos, pudiendo corresponder al pico detectado. ConclusionesSi bien los resultados son preliminares la visualización del pico de ~6650 Da en el espectro de identificación puede ser un método rápido para predecir la resistencia a colistina en cepas endémicas de {E. coli} productoras de MCR-1. La detección de este biomarcador no requiere reactivos ni procedimientos adicionales a los usados para la identificación, lo que hace probable que estos protocolos sean de rápida incorporación a la práctica diaria de la microbiología clínica. En regiones con plásmidos con características similares, este biomarcador podrá ser usado como predictor de resistencia a colistina.