Método de predifusion de colistina e inhibicion con EDTA para la deteccion de Escherichia coli portadora de MCR-1

YAURI K; GONZALES EDGAR; RIVERA CAMILO; DI CONZA JOSÉ; GUTKIND GABRIEL

Buenos Aires

Congreso; VIII Congreso SADEBAC; 2018

AAM

La colistina pertenece al grupo de antibióticos polipeptídicos conocidos como polimixinas y es considerado de última línea para el tratamiento de infecciones por gram negativos multi- y extremadamente resistentes. Anteriormente, se consideraba que la resistencia era cromosómica, relacionaba con mutaciones en genes reguladores de la biosíntesis o modificaciones del lípido A. En 2015, aparecieron los primeros informes sobre resistencia a colistina mediada por plásmidos, codificados por el gen mcr-1 (Mobile Colistin Resistance).Como las enzimas MCR dependen del zinc para su actividad, la quelación de este ion podría inhibirla. De ello se postula que las pruebas de inhibición con EDTA podrían ser útiles para su detección. En este estudio, evaluamos un ensayo basado en la pre-difusión del disco de colistina y la inhibición de la actividad de mcr-1 mediante EDTA.Se analizaron 18 aislamientos de enterobacterias: E. coli resistentes a colistina portador de mcr-1 (n=10), K. pneumoniae resistente a colistina carente de mcr-1 (n=1) y E. coli sensibles a colistina (n=5); los aislamientos fueron recuperados de humanos y animales. Se incluyeron Providencia rettgeri con resistencia natural a colistina (n=1) y E. coli ATCC 25922. La susceptibilidad fue determinada por microdilución El ensayo de pre-difusión con Inhibición por EDTA se realizó de la siguiente manera: sobre placas de agar Mueller-Hinton se colocaron dos discos de colistina (10 g) y se dejaron difundir durante 2 h a 37°C, se retiraron los discos y se dejaron las placas a temperatura ambiente por 18 a 24 horas. Se inocularon con una suspensión bacteriana de 0.5 de McFarland, se colocaron dos discos conteniendo 1 µmol de EDTA, uno sobre el lugar difusión de uno de los discos de colistina y el otro para confirmar que el EDTA no tenga efecto antibacteriano. Se midieron los diámetros de la zona de inhibición alrededor de los discos y el lugar de pre difusión, luego de 18h de incubación a 35°C. Todos los aislamientos resistentes a colistina mostraron un halo de inhibición menor o igual a 13 mm, por difusión directa; además, las E. coli resistentes productoras de MCR-1, mostraron un aumento ≥ 5 mm ( entre 5 y 15 mm) en el halo de inhibición alrededor de la zona de pre difusión en presencia de EDTA, en comparación con las zonas de inhibición de la pre difusión sin EDTA. Mientras que en las E. coli sensibles a colisitna (halos entre 14 y 16 mm, por difusión directa), la K. pneumoniae resistente a colisitna sin mcr-1 y P. rettgeri, no se observó este aumento de los halos de inhibición ( ≤ 1 mm). En conclusión, nuestros resultados sugieren que los ensayos de inhibición por EDTA previa pre difusión podría proporcionar un método simple y de fácil interpretación para detectar E. coli productora de MCR-1 en laboratorios de diagnóstico humano y veterinario. Sin embargo, son necesarios estudios adicionales con un mayor número de aislamientos para confirmar la precisión de esta metodología.