Secuenciación completa del genoma de Staphylococcus aureus mutantes resistentes a tigeciclina. Presencia de mutaciones en genes mepA, mepR y rpsJ.

HERRERA MELINA; DI GREGORIO SABRINA; HAIM MARÍA SOL; POSSE GRACIELA; CARDONA ST; MOLLERACH MARTA; DI CONZA JOSÉ

Buenos Aires

Congreso; VIII Congreso SADEBAC; 2018

AAM

S. aureus presenta una gran capacidad para desarrollar mecanismos de resistencia a diversos antibióticos. Previamente reportamos la selección in vitro de mutantes resistentes a tigeciclina (TIG), que mostraron un aumento de expresión del gen mepA, codificante de la bomba de eflujo MepA, involucrada en la expulsión de este antimicrobiano. Diversas mutaciones en genes mepA, mepR (regulador transcripcional de mepA) y rpsJ (codificante de una proteína ribosamal S10) han sido asociadas con resistencia TIG en S. aureus.El objetivo de este trabajo fue analizar comparativamente las secuencias del genoma completo de dos cepas de S. aureus mutantes resistentes a TIG (SARTm) y sus correspondientes cepas parentales para describir las posibles alteraciones nucleotídicas involucradas en dicha resistencia.La secuenciación completa del genoma de dos SARTm y sus correspondientes cepas parentales se realizó con la plataforma de Illumina MiSeq. El análisis in sílico de las secuencias se realizó mediante herramientas bioinformáticas, focalizando el análisis en la búsqueda de mutaciones en diversos genes de interés. El control de calidad de las secuencias se realizó mediante el programa FastQC. El ensamblaje de novo de los genomas se realizó con el programa SPAdes y la anotación a través de PROKKA. La búsqueda de mutaciones se hizo con el programa SNVphyl/snippy. Los parámetros métricos obtenidos se correlacionaron con una buena calidad del ensamblaje del genoma. Se encontraron 7 mutaciones puntuales en el genoma de la cepa 94159m y 6 en el de la cepa 2028m, con respecto a sus cepas parentales. Teniendo en cuenta los mecanismos antes mencionados, en las dos cepas SARTm se detectó la transición CxT que produjo la sustitución Thr29Ile en MepA. Además la cepa 2028m mostró la transición AxG que produjo el cambio Glu287Gly en MepA y una transición GxA en el gen mepR, dando lugar al cambio Arg79His en MepR. En estos casos se produjeron mutaciones con cambio de sentido. El análisis del genoma de la cepa 94159m detectó la transición GxT en el gen mepR, dando lugar a la aparición de un codón de stop en la posición 25 de la secuencia de aminoácidos de MepR. Además, en esta cepa se detectó una mutación con cambio de sentido en el gen rpsJ, codificante de una proteína ribosomal S10, que originó el cambio Lys57Met en la proteína. En los dos SARTm se encontraron además alteraciones en otros genes, pero no fueron asociadas con la reducción en la sensibilidad a TIG.El aumento de la expresión del gen mepA previamente descripta en los SARTm, se correlaciona con la presencia de alteraciones nucleotídicas en el regulador transcripcional mepR, lo cual afectaría su actividad represora sobre mepA, permitiendo su sobreexpresión con el consiguiente incremento de la expulsión de TIG del interior celular. Las mutaciones en los genes mepA y rpsJ también podrían contribuir a al incremento de los niveles de resistencia.