Detección rápida y directa de KPC-2 en enterobacterias mediante MALDI-TOF MS a partir de hemocultivos positivos

COSTA, AGUSTINA; FIGUEROA ESPINOSA ROQUE A; VAY CARLOS; BARRIOS, RUBÉN; DI CONZA JOSÉ; GUTKIND GABRIEL

Buenos Aires

Congreso; VIII Congreso SADEBAC; 2018

AAM

IntroducciónLa instauración rápida de una terapia antibiótica apropiada está asociada a un menor riesgo de mortalidad en pacientes con bacteriemia, por lo que es importante desarrollar metodologías que resuelvan con mayor rapidez el perfil de sensibilidad de los agentes etiológicos. La detección de mecanismos de resistencia se realiza en el laboratorio clínico mediante métodos fenotípicos y automatizados, generalmente a partir de colonia aislada en medio sólido. Hemos propuesto anteriormente la detección de KPC, β-lactamasas de espectro extendido, y cefalosporinasas plasmídicas por MALDI-TOF MS desde colonia, en paralelo a la identificación bacteriana. Particularmente, la detección temprana de KPC es relevante para instaurar un tratamiento adecuado en el paciente séptico. ObjetivoDetectar de forma rápida y directa la producción de KPC-2 en enterobacterias que han desarrollado en botellas de hemocultivos empleando MALDI-TOF MS.Materiales y métodosEl método se estandarizó empleando una cepa recombinante productora de KPC-2 como control positivo. Posteriormente, se desafiaron 17 aislamientos clínicos de diferentes especies de enterobacterias productoras de KPC-2 [Escherichia coli (2), Klebsiella pneumoniae (10), Serratia marcescens (3), Citrobacter braakii (1), Enterobacter cloacae (1)], y 21 aislamientos clínicos de enterobacterias productoras de diferentes BLEE o sensibles a β-lactámicos [E. coli (3), K. pneumoniae (10), C. braakii (2), S. marcescens (4), E. cloacae (2)], inoculados (104UFC ) en frascos de hemocultivo pediátrico con 5 ml de sangre humana. Luego de 18 horas de incubación, se tomaron alícuotas de 2 ml que fueron extraídas con solventes orgánicos. Las proteínas solubilizadas se analizaron por MALDI-TOF MS, utilizando ácido sinapínico como matriz. Los espectros obtenidos se analizaron con el sistema Bruker flexAnalysis LT versión 3.4 (Bruker Daltonics GmbH, Alemania) evaluando los picos en el rango de masas entre 17 y 50 kDa. ResultadosEn todas las muestras se detectó, por análisis visual directo, un pico en aproximadamente 28.500 Da, coincidente con el del control positivo, y en buen acuerdo con el peso teórico de la proteína madura (28.477 Da); este pico estuvo ausente en los aislamientos no productores de KPC-2, independientemente de la especie bacteriana ensayada, lo que daría una sensibilidad y especificidad del 100% en nuestras condiciones (examen visual de espectros, aun no automatizado). Conclusiones La tecnología MALDI-TOF MS permitiría distinguir rápidamente enterobacterias productoras de KPC-2 en forma directa a partir de botellas de hemocultivo positivizadas. Además, considerando que también se están incorporando protocolos que permiten la identificación de microorganismos por extracción directa de hemocultivos positivos utilizando el mismo equipo, es probable que estos protocolos sean de rápida incorporación a la práctica diaria de la microbiología clínica.