Marcadores para predicción rápida de resistencia a carbapenemes por KPC-2 en enterobacterias

FIGUEROA ESPINOSA ROQUE A; COSTA, AGUSTINA; CEJAS DANIELA; BARBERIS CLAUDIA; VAY CARLOS; GUTKIND GABRIEL; DI CONZA JOSÉ

Buenos Aires

Congreso; VIII Congreso SADEBAC; 2018

AAM

Introducción y objetivo: La rápida detección de las enterobacterias productoras de la enzima KPC-2 (EPK), la carbapenemasa plasmídica con mayor prevalencia a nivel mundial, favorece el pronóstico de los pacientes debido a la instauración de una correcta terapia antibacteriana. Además contribuye a la toma de decisiones para contener la diseminación de estos patógenos ya que los mismos pueden causar brotes intrahospitalarios. Entre las alternativas rápidas que usan MALDI-TOF MS para detectar EPK se cuentan con ensayos complejos, que buscan productos de hidrólisis de distintos β-lactámicos o protocolos pocos específicos que identifican marcadores como la proteína p019 (11109 Da) relacionada con el gen blaKPC asociado al transposón Tn4401a. En este trabajo se comparó la detección de la proteína p019 con la detección directa de la proteína madura KPC-2 (~28477 Da) como marcadores en la predicción de resistencia a carbapenemes.Materiales y Métodos: 100 aislamientos clínicos de diferentes especies de enterobacterias se incluyeron en el estudio: 57 cepas portadoras del gen blaKPC-2 [K. pneumoniae (41), E. cloacae (7), E. coli (4), S. marcescens (4) y C. braakii (1)]. Como control negativo se usaron 43 aislamientos productores de BLEE y como control positivo 1 E. coli DH5α transformante blaKPC-2/p019 y 1 E. coli TOP10 recombinante para blaKPC-2. La detección de las proteínas p019 y KPC-2 por MALDI-TOF se realizó a partir de colonia posterior a la extracción de proteínas con solvente orgánico. La proteína p019 se visualizó en el rango de 2000 a 20000 Da y la enzima KPC-2 en el rango de 17000 a 50000 Da, usando la matriz HCCA y ácido sinapínico respectivamente. Los espectros fueron capturados con el sistema MALDI Biotype y analizados con el programa flexAnalysis. El reconocimiento del entorno para blaKPC se realizó por mapeo genético por PCR.Resultados: Un pico distintivo de m/z ~28477 Da se observó en todos los espectros de los aislamientos productores de KPC-2 (enterobacterias, transformante y recombinante para KPC-2). El pico de la proteína madura de la enzima KPC-2 fue consistentemente ausente en las cepas usadas como control negativo. La proteína p019 ligada al Tn4401a asociado a blaKPC-2 logró identificarse sólo en 11 de las 57 (19%) cepas productoras de KPC-2 ensayadas [K. pneumoniae (9) y E. coli (2)]. En los aislamientos donde no se detectó p019, el gen blaKPC-2 tendría otros entornos genéticos distintos a el Tn4401a, como ser la ISKpn8 [(K. pneumoniae (14), S, marcescens (1) y C. braakii (1)], otra variante del Tn4401 [K. pneumoniae (5)] u otro elemento móvil aún no identificado (35).Conclusiones: El uso de MALDI-TOF para la detección indirecta de KPC mediante la proteína p019 asociada al Tn4401 presentó baja sensibilidad. Sin embargo, en la detección directa de la enzima madura de KPC-2 por MALDI-TOF se observó una sensibilidad y especificidad del 100%, estableciendo un marcador confiable para predecir la resistencia a carbapenemes y útil sobre todo en países como Argentina donde el entorno genético para este marcador de resistencia es versátil.