Caracterización genotípica de los sistemas de eflujo MepA y NorB en S. aureus resistentes a tigeciclina.

HERRERA MELINA; POSSE GRACIELA; MOLLERACH MARTA; DI CONZA JOSÉ

Rosario

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología -; 2016

Asociación Argentina de Microbiología

Introducción: La modificacion de la actividad eflujo es uno de los mecanismos de la resistencia a tigeciclina en Staphylococcus aureus. Previamente reportamos la selección in vitro de mutantes de S. aureus resistentes a tigeciclina. Estas mutantes aumentaban significativamente la sensibilidad a tigeciclina cuando se la combinaba con inhibidores de bombas de eflujo (reserpina 20 µg/ml). Objetivos: El objetivo de este trabajo fue analizar de manera comparativa las secuencias de dos bombas de eflujo MepA y NorB (asociadas a la expulsión de tetraciclinas y glicilciclinas) en mutantes de S. aureus resistentes a tigeciclina. Materiales y métodos: Se estudiaron 12 aislamientos clínicos de S. aureus de diferentes linaje genético y sus respectivos mutantes resistentes a tigeciclina seleccionados in vitro (SARTm). Los genes mepA y norB se amplificaron por PCR, para lo cual se diseñaron oligonucleótidos específicos. Los productos de PCR obtenidos se purificaron y secuenciaron. El análisis bioinformático comparativo de las secuencias se realizó mediante el software VECTOR 11.0 y el sitio online BLAST. Resultados: La secuencia aminoacídica de MepA en los 12 aislamientos parentales mostró 100 % de identidad con las secuencias de referencia.. En todos los SARTm se observaron una o más sustituciones nucleotídicas que generan cambios de aminoácidos en la proteína MepA. La mutación descripta con mayor frecuencia en la secuencia nucleotídica (5/12) fue la transición A x G (posición 985) que conduce al cambio Glu287Gly en la secuencia de aminoácidos. En 4/12 SARTm se observó la transición C x T (posición 211) que se traduce en la sustitución Thr29Ile en la secuencia de aminoácidos. Además, en 3/12 SARTm se encontró la transición C x T (posición 987) que produce un cambio aminoacídico Leu288Phe. Finalmente, en menor frecuencia se observaron otros cambios de nucleótidos que dieron lugar a sustituciones en MepA (Val415Leu, Ala274Val, Glu287Gly, Glu287Asp, Leu403Glu, Ser32Ile, Gly171Asp, Val443Gly, Gly44Arg, Ala161Thr, Val234Gly). El análisis comparativo de las secuencias de NorB se realizó en 4/12 aislamientos seleccionados al azar y no se observaron diferencias al compararlas con sus respectivas parentalesConclusión: este estudio demuestra la presencia de diferentes cambios en las secuencias que codifican para la bomba de eflujo MepA en los SARTm y no así en los sistemas de eflujo NorB analizados. Los cambios observados podrían contribuir a la resistencia a tigeciclina junto al incremento en la actividad eflujo en esta bomba.