Localización genética y caracterización bioquímica de OXA-101.

PORTO AYELEN; GUTKIND GABRIEL; DI CONZA JOSÉ

Rosario

Jornada; XIII Jornadas Argentinas de Microbiología.; 2008

Asociación Argentinas de Microbiología filial Rosario

OXA-101 es una b-lactamasa clase D derivada de OXA-10. Se ha descrito que las enzimas derivadas de OXA-10 son oxacilinasas con espectro de hidrólisis extendido a ceftacidima, cefotaxima, cefepime, cefpirome, aztreonam y moxalactam. Estas enzimas han sido ampliamente descriptas en bacilos Gram negativos no fermentadores, principalmente en Acinetobacter baumanii y P. aeruginosa y son las b-lactamasas más frecuentemente encontradas en integrones clase 1. OXA-101 ha sido detectada en 3 especies de enterobacterias distintas, formando parte de la región variable de un integrón clase 1 como gen en casete. Para analizar la localización genética de blaOXA-101 y su transferibilidad se realizó un ensayo de conjugación en medio sólido, utilizando como célula F+ a uno de los aislamientos clínicos que presenta esta β-lactamasa,  Enterobacter cloacae 153 -ECL153- (StrS, AmpR), y como F- a Escherichia coli HB101 (StrR, AmpS). Los transconjugantes fueron seleccionados en medio sólido suplementado con Str (100 µg/ml) y Amp (30 µg/ml). Se realizó PCR a las células seleccionadas de este ensayo para los genes intI1 y blaOXA-101, y se verificó la presencia de los mismos. Si bien ECL 153 posee el gen  blaTEM no se obtuvo el amplicón correspondiente en las transconjugantes. Se determinó la CIM de antibióticos β-lactámicos (ampicilina, piperacilina, cefalotina, cefoxitina, ceftazidima, cefotaxima, cefepime e imipenem) al microorganismo dador, receptor y células transconjugantes obtenidas. Sólo un aumento de los niveles de resistencia a ampicilina y piperacilina fue observado en las transconjugantes respecto de HB101. Además, se realizaron extractos crudos en los que luego se verificó la hidrólisis de ampicilina (500 µg/ml) tanto en ECL 153 como en transconjugantes mediante método iodométrico. Al realizar isoelectroenfoque al extracto crudo de ECL 153 se observó la presencia de tres enzimas,  una con  un punto isoeléctrico de 5,4 (correspondiente a TEM), otra con pI 8 (compatible con AmpC) y con pI 7,2 (posiblemente OXA-101). De los experimentos realizados puede concluirse: a) El integrón clase 1 que contiene el gen blaOXA-101 se encuentra localizado en un plásmido conjugativo. b) Los niveles de resistencia a β-lactámicos observados en las transconjugantes no concuerdan con la actividad postulada para este grupo de enzimas.