Detección de una posible b-lactamasa resistentes a inhibidores, TEM-163, en Escherichia coli.

BADARACCO ALEJANDRA; AYALA JUAN; RODRIGUEZ CYNTHIA; FAMIGLIETTI ANGELINA; GUTKIND GABRIEL; DI CONZA JOSÉ

Rosario

Jornada; XIII Jornadas Argentinas de Microbiología; 2008

Asociación Argentina de Microbiología, filial Rosario

TEM-1 es la β-lactamasa clase A presente con mayor frecuencia en aislamientos clínicos resistentes a ampicilina y sensibles a inhibidores de uso común en la clínica, como ser el ácido clavulánico. El amplio uso de estos inhibidores ha llevado a la emergencia de aislamientos resistentes a estas combinaciones, siendo una de las causas esporádicas la aparición de sustituciones aminoacídicas sobre TEM-1 (principalmente en las posiciones 69, 244, 275 y 276), que confieren resistencia a inhibidores (IRT). El fenotipo IRT fue caracterizado por la resistencia a la combinación β-lactámico/clavulánico con susceptibilidad a cefalosporinas de tercera generación, y a cefoxitina. Estas sustituciones solas o combinadas, disminuyen la eficacia de los inhibidores de β-lactamasas sin otra modificación fundamental del perfil de sustrato de la β-lactamasa TEM-1. Se estudiaron los mecanismos de resistencia presentes en un aislamiento de E. coli resistente a la combinación β-lactámico-inhibidor y se profundizó el estudio en la caracterización de enzimas tipo TEM. El microorganismo fue recuperado de un urocultivo en el Hospital de Clínicas en el año 2006. El aislamiento es resistente a ampicilina, piperacilina, cefalotina, a la combinación ampicilina/sulbactam y amoxicilina/clavulánico pero sensible a cefoxitina y cefalosporinas de tercera generación. El extracto crudo de dicho aislamiento mostró actividad b-lactamasa con nitrocefin y mediante isoelectronfoque analítico se observo una única enzima de pI 5,4. Mediante PCR se investigaron distintos grupos de genes: blaSHV, blaOXA-2, blaOXA-10 y blaTEM. En concordancia con el pI observado, sólo se obtuvo un amplicón del tamaño esperado para el grupo blaTEM. La secuenciación de dicho fragmento reveló que contiene un nuevo gen (que codificaría para la enzima TEM-163, nº acc: EU815939) muy cercano a blaTEM-122 (considerada resistente a inhibidores). Ambas exhiben el mismo cambio nucleotídico respecto a blaTEM-1 traducido en un cambio aminoacídico (R275Q), pero se diferencian  ya que blaTEM-163 presenta una transversión adicional que se traduciría dentro de la proteína madura en un cambio (L289H). Que el nuevo gen conserve la modificación que le otorga a TEM-122 resistencia al inhibidor nos permite postular que el mismo podría tener un comportamiento similar.