ESTUDIOS COMPARATIVOS DE VARIABILIDAD GENÉTICA EN CERCOSPORA KIKUCHII MEDIANTE EL USO DE MARCADORES MOLECULARES

LATORRE MARÍA GABRIELA; VACCARI MARÍA; DI CONZA JOSÉ; LURÁ CRISTINA

Santa Fe

Congreso; Congreso Argentino de Micología; 2008

Introducción: Los marcadores moleculares constituyen una herramienta poderosa para la caracterización de diferentes hongos patógenos de plantas. Cercospora kikuchii es el agente causal del Tizón de la hoja y de la Mancha púrpura de la semilla, en soja. Objetivo: Comparar la utilidad de diferentes marcadores moleculares que se utilizan para determinar variabilidad genética en este fitopatógeno. Materiales y Métodos: Se estudiaron 11 aislamientos de C. kikuchii obtenidos de soja, cultivada en la provincia de Santa Fe y con sintomatología de la enfermedad. Simultáneamente se procesaron C. kikuchii NBRC 6711 y C. sojina NBRC 6715. Las técnicas utilizadas fueron RFLP, RAPD y microsatélites. Una vez amplificados y purificados los fragmentos ITS del ADNr de cada uno de los hongos, se digirieron con 6 enzimas de restricción. Los amplicones fueron además, enviados para su secuenciación. Para el RAPD se utilizaron 9 oligonucleótidos. El análisis de las secuencias microsatélites se llevó a cabo con el primer (GTG)5. Se realizó el análisis de los dendrogramas correspondientes y se fijó un grado de similitud del 60%. Resultados: En todos los casos la amplificación de la región ITS mostró un fragmento de 550 bp. Cuatro de las enzimas ensayadas generaron patrones de bandas que, si bien fueron de diferentes tamaños, resultaron coincidentes para todos los hongos estudiados. Rsa I y Hind III no presentaron sitios de corte. El análisis bioinformático de las secuencias, mostró 100% de identidad entre ellas y con la secuencia de C. kikuchii (GenBank, Nº de acceso AY266160). RAPD permitió obtener entre 17-30 fragmentos amplificados/oligonucleótido, con un rango de tamaño de 2000-150 bp. El 98,7 % del total de las bandas resultaron polimórficas. Con (GTG)5 se obtuvieron 25 fragmentos amplificados, con un rango de tamaño de 1200 y 150 bp, presentando un 100% de polimorfismo. Con RAPD, los aislamientos quedaron distribuidos en 7 grupos y con microsatélites, en 4. Los patrones de restricción no presentaron diferencias en forma consistente para los distintos aislamientos de C. kikuchii estudiados, lo que fue confirmado por el análisis de las secuencias. Conclusiones: Los resultados obtenidos indican que RAPD y microsatélites son de mayor utilidad para el estudio de la variación genética que RFLP siendo, además, técnicas más sencillas y de menor costo. Referencias bibliográficas: -Longato et al. Mycol Res 1997, 101:425-432. -Siboe et al. J Gen Appl Microbiol 2002, 46: 69-78. -Williams et al. Nucleic Acids Res 1990, 18: 6531-6535.