Analisis de la secuencia de los fragmentos ITS de aislamientos de Cercospora de la provincia de Santa Fe.

MATTIO MÓNICA; DI CONZA JOSÉ; LURÁ CRISTINA

Cordoba - Argentina

Congreso; XI Congreso Argentino de Microbiología; 2007

AAM

Introducción En Argentina, la soja tiene una fuerte incidencia en la economía nacional. Entre los hongos que más frecuentemente afectan su cultivo, en la última etapa, se encuentran dos especies pertenecientes al género Cercospora: C. kikuchii (Matsumoto & Tomoyasu) Gardner, causante del “tizón de la hoja” y la “mancha púrpura de la semilla”, y C. sojina Hara, responsable de la mancha en “ojo de rana”. Su identificación, basada en el aspecto morfológico y en sus características fisiológicas resulta complicada debido a la gran similitud fenotípica  que presentan y al comportamiento según se encuentren en el sustrato natural o en medios artificiales, por lo que resulta importante trabajar con técnicas moleculares que permitan disponer de un mayor número de caracteres para facilitar su diferenciación. La amplificación, por PCR, de los segmentos ITS del ADNr y el análisis de sus secuencias es muy útil debido a que su hipervariabilidad permite diferenciar entre especies y aún dentro de una misma especie.  Objetivos 1)      Amplificar los segmentos ITS del ADNr de aislamientos de Cercospora obtenidos a partir de soja que se cultiva en la provincia de Santa Fe. 2)      Analizar y evaluar la homología entre las secuencias de los aislamientos y compararlas con las de cepas patrones y las depositadas en bases de datos. Materiales y Métodos Se trabajó con 13 hongos aislados a partir de las lesiones típicas de “tizón de la hoja” observadas en plantas de soja cultivadas en la provincia de Santa Fe. Todos los aislamientos poseían las características macro y microscópicas de C. kikuchii. A cada uno de los hongos se les extrajo el ADN y se amplificaron las regiones ITS con los oligonucleótidos ITS4 e ITS5, mediante una PCR "hot start". Los amplicones obtenidos se purificaron y secuenciaron en ambas cadenas. Las secuencias fueron analizadas con el programa Vector NTI.6 y se compararon con las secuencias depositadas en base de datos (NCBI BLAST). Idéntico procedimiento se llevó a cabo con 4 cepas de la colección Nite Biological Resource Center (NBRC): Cercospora kikuchii NBRC 6711, C. kikuchii NBRC 6712, C. kikuchii NBRC 6713 y C. kikuchii NBRC 6714. Resultados Los fragmentos de ITS secuenciados (518 bp) de 16 de los hongos, presentaron 100% de identidad entre ellos y con la secuencia correspondiente a la región ITS de C. kikuchii depositada en base de datos (Nº Acceso: AY633838). Respecto al resto, un único aislamiento presentó un cambio nucleotídico (C472T) dentro del segmento ITS2. Conclusiones El análisis de las secuencias ITS del ADNr fortaleció la identidad de los aislamientos caracterizados micromorfológicamente como C. kikuchii y  permitió distinguir a uno de ellos dentro de esta especie, detectando un cambio nucleotídico dentro de la región hipervariable de este segmento.