Confirmación del mecanismo de resistencia en Escherichia coli presuntivamente caracterizadas como portadoras de enzimas de tipo IRT u OXA.

MAZZETTI AGOSTINA; PINO MARYLÚ; SUJEMECKI A.; BONDULICH C.; GIOVANAKIS MARTA; GUTKIND GABRIEL; DI CONZA JOSÉ; RADICE MARCELA

Ciudad Autonoma de Buenos Aires

Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología; 2013

Asociación Argentina de Microbiología

Introducción: La resistencia a ampicilina (AMP) y su combinación con inhibidores de ß-lactamasas en Escherichia coli, se puede deber a mecanismos no enzimáticos (impermeabilidad) y también a mecanismos enzimáticos, entre los que se encuentran: producción de ß-lactamasas tipo OXA, hiperproducción de AmpC cromosómica y plasmídica, hiperproducción de ß-lactamasas tipo TEM y/o SHV y producción de TEM resistentes a inhibidores (IRT). Objetivos: El objetivo de este trabajo fue caracterizar los mecanismos enzimáticos involucrados en aislamientos de E. coli proveniente de infecciones urinarias caracterizados como probables productores de enzimas tipo OXA o IRT según el equipo comercial automatizado Vitek 2. Materiales y Métodos: Durante el período comprendido entre Noviembre 2012- Febrero 2013 en el Hospital Británico de Buenos Aires se aislaron 720 E. coli de las cuales 13 aislamientos fueron caracterizados como ?fenotipo de ß-lactamasa IRT u OXA? por Vitek 2, con CIM a AMP ≥32 µg/ml y ampicilina-sulbactama (AMS) entre 16-≥32 µg/ml. El perfil de resistencia se corroboró mediante métodos de difusión y dilución en medio sólido según pautas CLSI. Los genes blaTEM, blaSHV blaOXA-2 y blaOXA-10, fueron detectados por PCR empleando cebadores específicos y los amplicones obtenidos fueron secuenciados. La actividad enzimática específica fue determinada por métodos espectrofotométricos empleando AMP como sustratos. Resultados: Los valores de CIM por dilución en medio sólido (rango en µg/ml) para AMP, AMS, amoxicilina ? ácido clavulánico (AMC), cefalotina y cefoxitina fueron entre 256->1024,16-32, 16-64, 4-16, 2-8, respectivamente. En todos los casos se observó una disminución de los valores de CIM de al menos 4 diluciones para AMS y AMC respecto de AMP. Se detectó la presencia de un amplicón para blaTEM en 9/13 aislamientos, cuyas secuencias correspondieron 100% a blaTEM-1. Todos los aislamientos fueron negativos para el screening de genes codificantes de enzimas del grupo OXA-2, OXA-10 y SHV. Se corroboró la hiperproducción de TEM-1 en los extractos crudos de todos los aislamientos portadores de este gen (AEAMP> 200 nmoles /min.mg). Cabe destacar que los 4 aislamientos restantes mostraron actividad ß-lactamasas cuyos determinantes de resistencia no han sido aún caracterizados. Conclusiones: Si bien el impacto clínico del mecanismo de resistencia involucrado en este fenotipo no es relevante, para fines epidemiológicos en aquellos casos en que el Vitek detecta ?fenotipo de ß-lactamasa IRT u OXA?, sería necesario realizar estudios moleculares para su confirmación.