Caracterización del proceso de rechazo celular agudo en las diferentes capas del injerto en un modelo experimental de Trasplante de Intestino.

PABLO STRINGA ; MARTÍN RUMBO; IVANA IVANOFF MARINOFF; GABRIEL GONDOLESI

La Plata

Jornada; Jornadas de la Facultad de Ciencias Médicas, UNLP; 2018

Facultad de Ciencias Médicas, UNLP

Introducción: El trasplante intestinal (TI) presenta muchos desafíos, entre ellos, la necesidad de comprender y detectar de manera temprana los procesos de rechazo celular agudo (RCA). Los modelos experimentales de TI se utilizan para evaluar estrategias de intervención y mejorar el conocimiento de la biología de este tipo de trasplante. El objetivo de nuestro estudio fue determinar la cinética del rechazo del injerto utilizando un modelo heterotópico de TI en ratas, con especial atención en la caracterización del fenómeno de RCA en las diferentes capas del intestino trasplantado, ya que la mayoría de la información que proviene de la clínica se centra en la mucosa, única capa a la que se puede acceder mediante biopsias endoscópicas. Materiales y métodos: Se realizaron TI alogénicos (ALO) (Sprague Dawley donante- Wistar receptor) siguiendo protocolos estandarizados. El RCA fue evaluado y diagnosticado mediante seguimiento clínico y análisis histopatológico de biopsias intestinales teñidas con H-E. Además, para determinar expression de genes se realizó PCR real time en intestino completo y en muestras de los diferentes compartimentos intestinales obtenidas por microscopía de disección láser ( epitelio, capa muscular y capa serosa) a los 5 y 10-12 días pos-TI. Por otro lado, se realizó un grupo de TI isogénico (ISO) como control( Wistar como donante y receptor). Resultados: Desde el día 5 pos-TI se observaron lesiones histológicas compatibles con rechazo. El RCA leve fue el grado más característico en este tiempo de muestreo. Por otro lado, en todas las muestras obtenidas a los 10-12 días pos-TI se diagnosticó RCA severo. En lo que respecta al análisis microscópico descriptivo, las muestras evaluadas a los 5 días pos-TI presentaron una arquitectura conservada, con presencia de células apoptóticas confluentes y sueltas en el epitelio intestinal. Además se evidenció infiltrado celular inflamatorio perivascular en vasos mesentéricos y en las capas muscular y serosa. En fases tardías de RCA (10-12 dias pos-TI) se evidenció infiltrado celular inflamatorio severo, daño epitelial, ausencia de enterocitos en algunas vellosidades, zonas con úlceras, necrosis y un aumento considerable en el número de células apoptóticas En la capa muscular se observaron células inflamatorias y edema. En la capa serosa se destacó la presencia de signos histológicos compatible con fibrosis. En el grupo ALO, algunos marcadores aumentaron considerablemente durante la fase temprana de rechazo. La expresión de CXCL10 se incrementó 120 ± 80 en comparación con tejido intestinal no trasplantado. Además, INF-g e IDO (dependendiente de la estimulación INF-g), mostraron una tendencia a aumentar tiempos tempranos de muestreo. Otros genes relacionados con la inflamación, como CXCL1 e IL-6 mostraron un aumento constante en el grupo ALO a los 10-12 días pos-TI, cuando el proceso de RCA es de carácter severo. Para determinar si existían diferencias en cuanto a la expresión de genes en las diferentes capas del intestino se evaluaron las muestras obtenidas mediante microscopía de disección láser: niveles elevados de IL-6 y CXCL1 se observaron a tiempos tardíos de RCA con importante activación en la capa muscular y serosa de intestinos ALO. Resulta interesante destacar que la expresión de IL-22 sólo se pudo medir en la capa epitelial en muestras ALO tomadas a 10-12 días pos-TI, lo que indica la expresión inducida por el RCA en este compartimiento. Por último, vale destacar que la capa serosa mostró algunos de los aumentos relativos más altos en la expresión de genes proinflamatorios. Conclusión: A pesar de que en el área clínica del TI el RCA se ha caracterizado satisfactoriamente en la mucosa, nuestro modelo experimental permite documentar que, desde estadíos tempranos, todas las capas de injerto están afectadas por el RCA. Las capas muscular y serosa muestran alta expresión de marcadores proinflamatorios, con expresión diferencial de IL-22 en el compartimento epitelial. Esta información podría ser útil en la búsqueda de biomarcadores tempranos de rechazo.