INVESTIGADORES
ROMAN Ernesto Andres
congresos y reuniones científicas
Título:
En la búsqueda de determinantes estructurales del plegado de un péptido intrínsecamente desordenado
Autor/es:
PABLO ROSI; ERNESTO A. ROMAN; FRANCISCO LUIS GONZALEZ FLECHA; JOSÉ MARÍA DELFINO; JAVIER SANTOS
Lugar:
La Plata, Provincia de Buenos Aires, Argentina.
Reunión:
Congreso; Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2008
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofisica
Resumen:
<!--
/* Style Definitions */
p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal
{mso-style-parent:"";
margin:0cm;
margin-bottom:.0001pt;
mso-pagination:widow-orphan;
font-size:12.0pt;
font-family:"Times New Roman";
mso-fareast-font-family:"Times New Roman";}
a:link, span.MsoHyperlink
{color:blue;
text-decoration:underline;
text-underline:single;}
a:visited, span.MsoHyperlinkFollowed
{color:purple;
text-decoration:underline;
text-underline:single;}
@page Section1
{size:612.0pt 792.0pt;
margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm;
mso-header-margin:36.0pt;
mso-footer-margin:36.0pt;
mso-paper-source:0;}
div.Section1
{page:Section1;}
-->
La tiorredoxina de E. coli (TRX) es una proteína de 108
residuos, muy estable y con una topología compleja. Históricamente ha sido
utilizada como
modelo para el estudio de la estabilidad y el plegado. En nuestro laboratorio
se ha determinado que la hélice Cterminal (péptido 94-108, LSKGQLKEFLDANLA)
juega un papel central en la consolidación de la estructura final de la TRX (1).
Estudios de dicroísmo circular (CD) del péptido 94-108 en solución acuosa
(fosfato de sodio 2 mM,
pH 7.0) mostraron un espectro compatible con la ausencia de estructura
secundaria. La adición, tanto de trifluoroetanol (TFE, 20 % v/v) como
dodecilsulfato sódico (SDS, 2.0-5.0 mM), indujo bandas dicroicas
compatibles con la estabilización de estructura helicoidal.
En este trabajo nos preguntamos qué características de la
secuencia del péptido 94-108 contribuyen a la estabilidad de su estructura
secundaria. Para esto se utilizó SDS como inductor de estructura y se
prepararon mutantes puntuales del péptido 94-108 en las que fue
reemplazado cada residuo de leucina por alanina: L94A, L99A, L103A y L107A. El
análisis de la elipticidad a 220 nm en función de concentraciones submicelares
de SDS (0.0 5.0 mM)
mostró que todas las variantes presentan una estabilización de estructura
helicoidal en concentraciones de SDS entre 3 y 5 mM. Sin embargo, el punto
medio de la transición conformacional para las variantes L99A y L103A se
encuentra desplazado a concentraciones mayores de SDS, comparado con las
observadas para las variantes L94A y L107A. Todas las transiciones
conformacionales observadas fueron a concentraciones mayores que la observada
para el péptido wild type (1.5
mM) y como en este péptido fueron reversibles,
alcanzando el equilibrio durante el mezclado.
Experimentos de electroforesis capilar en presencia del SDS
(en el mismo rango de concentraciones) demostraron que este detergente se une a
los péptidos, y que en consecuencia, el cambio conformacional podría estar
mediado por la interacción directa del SDS con el péptido. Los tiempos de
retención para cada péptido resultaron significativamente distintos, mostrando
menor movilidad electroforética a concentraciones mayores de SDS.
En conjunto, estos resultados sugieren que cada péptido
estaría uniendo cantidades distintas de SDS, así como también que la tendencia
a formar estructura helicoidal podría estar determinada primariamente por el
fenómeno de unión.
(1) Biochemistry.
2007 May 1;46(17):5148-59
Agradecimientos: Dra. Nora Vizioli y Dr. Mariano González
Lebrero. Con financiamiento de ANPCyT, CONICET, UNQ y UBACyT.