APLICABILIDAD DE LOS SISTEMAS BIFÁSICOS ACUOSOS POLIETILENGLICOL/TARTRATO DE SODIO EN LA PURIFICACIÓN DE TRIPSINOGENO Y QUIMOTRIPSINÓGENO BOVINOS

PELLEGRINI MALPIEDI, LUCIANA; PICÓ, GUILLERMO; NERLI, BIBIANA

Salta

Congreso; XVI Congreso Argentino de Fisicoquímica y Química Inorgánica; 2009

Asociación Argentina de Investigación Fisicoquímica

La extracción líquido-líquido con sistemas bifásicos acuosos (SBAs) constituye una operación unitaria de creciente empleo en los últimos años en diferentes protocolos de purificación. En trabajos previos, se ha trabajado con SBAs formados por polietilenglicol y citrato de sodio (PEG/NaCit) para la purificación de dos proteasas pancreáticas: tripsina y quimotripsina. Las mismas son sintetizadas y almacenadas en el páncreas de mamíferos en forma de  precursores inactivos: tripsinógeno (TRPz) y quimotripsinógeno (QTRPz). El objetivo de este trabajo fue estudiar la aplicabilidad de diferentes SBAs formados por polietilenglicol y tartrato de sodio (PEG/NaTart) a la purificación de dichos zimógenos, lo cual permitiría, luego de su activación, obtener las proteínas de interés. En primer lugar, se estudió el perfil de reparto de TRPz y QTRPz por separado empleando SBAs formados por PEGs de diferentes pesos moleculares, a pH regulado en 5,00 y con diferentes composiciones totales expresadas a través de la longitud de la línea de unión del respectivo diagrama binodial. Además se estudió el efecto de la temperatura, agregado de sales y diferentes relaciones de volúmenes de fase (Vt/Vb) sobre el coeficiente de reparto (Kr) de las proteínas. La selección de los SBAs a ser utilizados para la purificación de TRPz y QTRPz  a partir de su fuente natural, el páncreas bovino, fue realizada a partir del cálculo de los valores de rendimiento (R) y pureza (P) que se obtendrían a partir de mezclas de ambos zimógenos, asumiendo que los valores de Kr no se afectan en mutua presencia. Los resultados obtenidos mostraron que en la mayoría de los SBAs, TRPz presenta valores de Kr  menores a los de QTRPz, indicando que el equilibrio de reparto se halla más desplazado hacia la fase rica en sal. Por otro lado, se observó que los valores de Kr disminuyen al incrementarse el tamaño del polímero y que los mismos resultan ser sensibles a la concentración de PEG y NaTart. Los SBAs seleccionados fueron aquellos formados por PEGs de peso molecular 600, 2000, 4000 y 6000, con composiciones totales correspondientes sólo a dos de las líneas de unión ensayadas y a una relación de volúmenes de fase unitaria. El homogenado fue sembrado en el SBA sin ningún tratamiento previo, en una proporción correspondiente al 5 % de la masa total del sistema. Los valores de Kr para cada una de las proteínas mostraron ligeras diferencias con respecto a aquellos que habían sido determinados para las mismas en forma aislada. Sin embargo, para la mayoría de los casos se mantuvo la mayor tendencia de TRPz a repartirse hacia la fase rica en sal con respecto a QTRPz. Finalmente, los SBAs que mostraron mayor selectividad fueron los formados por PEGs de pesos moleculares 600 y 4000. Los mismos presentaron valores de R comprendidos entre 70-90 % y factores de purificación cercanos a 3, demostrando que esta metodología podría ser implementada como un primer paso de un protocolo de purificación.