APLICACIÓN DE SISTEMAS BIFÁSICOS ACUOSOS FORMADOS POR UN POLÍMERO TERMO REACTIVO Y CITRATO DE SODIO A LA SEPARACIÓN DE TRIPSINA Y QUIMOTRIPSINA BOVINAS.

REBAGLIATI, MARTÍN; TUBÍO GISELA; PICÓ GUILLERMO; NERLI BIBIANA

Rosario

Congreso; B.XXVII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario.; 2007

Sociedad de Biología de Rosario

Los sistemas bifásicos acuosos (SBAs) formados por un polímero termo-reactivo y una sal son particularmente interesantes, debido a su bajo impacto medioambiental, ya que permiten por calentamiento de la fase rica en polímero por encima de una temperatura crítica (TSF),  recuperar la proteína de interés y reciclar el polímero. El objetivo de este trabajo es comparar la propiedades de reparto de dos proteasas pancreáticas: tripsina (TRP) y quimotripsina (QTRP) en estos SBAs para emplearlos  en su separación. Se emplearon y caracterizaron dos nuevos SBAs formados por: i) copolímero al azar de óxidos de etileno y propileno (EO50PO50) /citrato de sodio (Cit) y ii) copolímero ordenado de óxidos de etileno y propileno (EO80PO20)/Cit. Se obtuvieron los diagramas binodiales y las correspondientes líneas de unión a diferentes pHs (5,20; 6,20 y 8,20) y temperaturas (5, 20 y 40 °C). Se determinaron las TSFs de las fases superiores, ricas en el polímero termo-reactivo, y se estudió el efecto de éste sobre las propiedades catalíticas de ambas  enzimas. Se determinó el coeficiente de reparto (Kr) de TRP y QTRP en diferentes condiciones experimentales.  Las curvas binodiales obtenidas mostraron características similares a las de otros SBAs polímero/sal con corrimientos esperados hacia menores concentraciones de ambos componentes ante incrementos de pH, temperatura e hidrofobicidad del polímero. La fase superior de los SBAs EO50PO50 /Cit y EO80PO20/Cit presentaron TSFs de 27 y 100 °C respectivamente. Por otro lado, la presencia de EO50PO50 durante intervalos crecientes de hasta 3 hs. no afectó la actividad catalítica de ambas enzimas en el rango 20-50 °C.  El equilibrio de reparto de TRP se mostró más desplazado hacia la fase superior que el de QTRP en la mayoría de los SBAs ensayados. El aumento de la longitud de la línea de unión (logrado por aumento en la concentración total inicial de polímero y sal) produjo un marcado incremento de Kr de TRP mientras que Kr para QTRP sólo se vio afectada levemente. Los SBAs EO50PO50/Cit pH 6,2 mostraron la mayor capacidad separativa: KrTRP/KrQTRP = 4. Esta última propiedad junto con su baja temperatura de separación de fases (27 °C) y el efecto estabilizador sobre la actividad catalítica de las enzimas ensayadas, muestran a estos SBAs como muy convenientes para la separación de estas proteínas pancreáticas.