INVESTIGADORES
CORIGLIANO Mariana Georgina
congresos y reuniones científicas
Título:
EVALUACIÓN DE LA PATOGENICIDAD DE CEPAS DE Yersinia enterocolítica: PRESENCIA DE GENES POR PCR MULTIPLEX Y PRUEVAS DE VIRULENCIA.
Autor/es:
CORIGLIANO, MARIANA G; FAVIER, GABRIELA; ESCUDERO, MARÍA ESTHER; STEFANINI DE GUZMÁN, ANA MARÍA
Lugar:
Córdoba
Reunión:
Conferencia; XI Congreso Argentino de Microbiología; 2007
Resumen:
Yersinia
enterocolítica es un enteropatógeno que incluye 6 biotipos,
B, más 60 serotipos, siendo los más asociados a infección en humanos los
biotipos 1 B, 2, 3 y 4 y los serotipos O:3, O:9 y O:8. Su patogenicidad es
atribuida a factores de virulencia codifocados a nivel de un plásmido, y a
nivel cromosomal. El objetivo de este trabajo fue evaluar la presencia de genes
de virulencia mediante reacción en cadena de la polimerasa múltiple, PCRm, y
mediante la utilización de pruebas de virulencia in vitro (PV), para la
identificación de cepas patógenas de Y.
enterocolítica. Se ensayarons diez cepas de Y. enterocolítica aisladas de
alimentos y de muestras humanas en la ciudad de San Luis, Argentina. Se
diseñaron oligonucleótidos específicos para los genes virF (433 pb), invA (558
pb), ail (370 pb), htrA (123 pb), yst (192 pb). Mezcla de reacción:muestra 3 ml, dNTPs 1 ml, MgCl2 5 ml,
buffer 10x 5ml, oligonucleótidos 0,2 ml t Taq polimerasa 0,25 ml. Condiciones
térmicas: 1 ciclo a 94 ˚C 3 min, 35 ciclos a 94 ˚C 1,5 min, 58 ˚C 1,5 min, 72 ˚C
1 min y 1 ciclo a 94 ˚C 7 min. Se ensayaron las siguientes pruebas de virulencia:
autoaglutinación en caldo Rojo de metilo- Voges Proskaver, RM-VP, captación de
rojo de congo y dependencia de calcio en agar rojo congo-oxalato de magnesio,
CR-MOX, y en agar rojo congo/tripticase soja, CR-TSA; Pirazinamidasa en agar
pirazinamida, P, e hidrólisis de esculina en agar esculina bilis, E. Las cepas
de Y. enterocolítica B2 O:9, fueron
positivas para la banda correspondiente a los genes virF e invA, mientras que las cepas de Y. enterocolítica B1A mostraron la banda correspondiente al gen yst. Cepas pertenecientes a los bioserotipos
patógenos quedaron en evidencia por presencia de turbidez a 22˚C y
ai=utoaglutinación a 37˚C, en caldo RM-VP; predominio de colonias rojas
diminutas en CR-MOX, y ausencia de cambio de color en los medio P y E. Se
observó total concordancia entre resultados por PV y PCRm. CONCLUSIÓN: Las
pruebas de virulencia in vitro, podrían ser usadas como pruebas preliminares de
tamiz para identificar aislamientos de Y enterocolítica
que por su potencial patógenos necesitan futuras investigaciones complejas
y técnicas moleculares costosas como PCRm..