Nueva población de células madre humanas con capacidad inmunoreguladora. Potencial empleo como terapia celular en la diabetes autoinmune

ML GIMENO ; L ARIOLFO; AE BARCALA TABARROZI; AI ATTORRESI; L CORRALES; TC OLIVEIRA; MC SOGAYAR; L LABRIOLA; RICARDO A. DEWEY; MJ PERONE

Congreso; XIX Congreso Argentino de Diabetes; 2014

Sociedad Argentina de Diabetes

Introducción. Recientemente, ha sido descripta una nueva población de células madre pluripotentes denominadas Muse (multilineage differentiating stress enduring). Aún, no se conoce si estas células poseen actividad inmunomoduladora y/o regenerativa en el contexto de la diabetes autoinmune. La diabetes mellitus tipo 1 (T1DM) es una enfermedad inflamatoria autoinmune en la que existe muerte de células β mediada por linfocitos T. Objetivos. 1) optimizar las condiciones de aislamiento y caracterización de células Muse derivadas de tejido adiposo humano; 2) evaluar su capacidad inmunomoduladora empleando un clon diabetogénico murino de linfocitos T-CD4+. Materiales y Métodos. Aislamiento de células Muse de tejido adiposo humano proveniente de cirugía por liposucción mediante digestión con Colagenasa en condiciones de estrés celular. Las células Muse se cultivaron en DMEM 20%FCS/antibióticos durante 10-14 días. La caracterización fenotípica se realizó mediante citometría de flujo. Inmunofluorescencia seguido de microscopía confocal para la determinación de marcadores de pluripotencia. Se cultivaron esplenocitos de ratones transgénicos para el receptor T en linfocitos CD4+ (ratón NOD.BDC2.5) que reconoce un Ag diabetogénico específico. Se emplearon ratones NODscid para realizar el ensayo de teratogénesis. Se cuantificó mINF mediante ELISA. Resultados. Se obtuvieron 2-3x105 Muse/g tejido adiposo. Las células Muse expresaron los factores de pluripotencialidad: Sox2, Oct4, Nanog, SSEA-3/4, TRA1-60, y fueron positivas para los clusters de diferenciación: CD90, CD29, CD73, CD105, CD44 y negativas para: CD34, CD45, HLA-DR. No formaron teratomas luego de la inyección intratesticular (106 Muse) durante el periodo estudiado (30; 60; 90 y 180 días). El medio condicionado (72h) de células Muse disminuyó la secreción Ag específica de mINF de linfocitos T-CD4+ (7015 % vs Ag-esp, p