Expresión génica controlada para el tratamiento de tumores sólidos mediante terapia génica con células madre hematopoyéticas.

R. A. DEWEY; F.NOYAN; I. AVEDILLO DÍEZ; M. HAPCKE; C. KLEIN

Mar del Plata

Congreso; LIV Reunion Cientifica Anual Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)-Reunion Cientifica Sociedad Argentina de Inmuología (SAI).; 2009

El microambiente tumoral está formado por un pronunciado infiltrado inflamatorio compuesto de linfocitos T y macrófagos, los cuales se originan a partir de células madre hematopoyéticas (HSC). Nuestra hipótesis se basa en que el transplante de HSC modificadas genéticamente permitiría una expresión sostenida de transgenes terapéuticos en células hematopoyéticas efectoras que infiltren los tumores sólidos. Para permitir la expresión del transgen terapéutico sólo en el área tumoral, desarrollamos vectores lentivirales en los cuales la expresión génica está controlada por el promotor inducible por stress de la HSP70b humana. Inicialmente y mediante acción de la hipertermia, estudiamos in vitro las propiedades de inducibilidad de HSP en vectores lentivirales conteniendo GFP, en células tumorales humanas y de ratón. En ambos tipos celulares el máximo de expresión génica (p<0.01) se logró 6-9 horas luego de la incubación de las células a 43°C por 1 hora. Posteriormente analizamos in vivo, mediante transplante de medula ósea, la expresión de GFP dirigida por el promotor HSP, en células del infiltrado inflamatorio de gliomas subcutáneos. Observamos que en las distintas subpoblaciones del infiltrado tumoral estudiadas, el promotor HSP puede ser inducido por el stress generado por el microambiente tumoral. Para comprobar el efecto antitumoral de la estrategia, en los vectores lentivirales se reemplazó GFP por un mutante dominante negativo del receptor II de TGF-b (TbRIIDN). En ratones transplantados con HSC que codifican para TbRIIDN bajo el promotor HSP, se produce una masiva respuesta antitumoral equivalente (p>0.05) a la obtenida mediante el mísmo transgen bajo la acción del promotor constitutivo. En resumen, la modificación genética de células madre hematopoyéticas y la expresión controlada de transgenes terapéuticos en células inflamatorias que infiltran el tumor constituye una estrategia experimental novedosa para el desarrollo de terapias anti-tumorales.