Análisis de la expresión de dos inhibidores de serin proteasas tipo kazal en plantas de Arabidopsis thaliana infectadas por Botrytis cinerea

CONTRERAS, M.; SANDER, M.; ROSSI, F.; PARIANI, S.; CORIGLIANO, M.; PIECKENSTAIN, F.; CLEMENTE, M.

Buenos Aires

Simposio; VIII Simposio Nacional de Biotecnología REDBIO; 2011

REDBIO Argentina

SECCION 2 Análisis de la expresión de dos inhibidores de serin proteasas tipo kazal en plantas de  Arabidopsis thaliana infectadas por Botrytis cinerea Contreras, M.1, Sander, V.1, Rossi, F.2, Pariani, S.1, Corigliano, M.1, Pieckenstain, F.2, Clemente, M.1, 1Unidad de Biotecnología 6, IIB-INTECH, Chascomús, Argentina. 2Unidad de Biotecnología 3, IIB-INTECH, Chascomús, Argentina. Una búsqueda en el sitio www.arabidopsis.org permitió identificar dos genes que codificarían para proteínas inhibidoras de serin proteinasas tipo Kazal: AT3G61980 y AT4G01575. La comparación con la base de datos de secuencias de proteínas confirmó que estas proteínas mostraban identidad con otras proteínas Kazal. Se identificaron los seis residuos de cisteínas y el residuo de tirosina altamente conservado en los dominios Kazal de diferentes especies. Se identificó el sitio reactivo P1 conformado por una arginina. Asimismo, se analizó la expresión basal de estos dos genes de Arabidopsis thaliana en diferentes tejidos. Además, analizamos el efecto de la infección por Botrytis cinerea sobre la expresión de ambos genes en hojas de A. thaliana. Los niveles basales de transcriptos para ambos genes Kazal se midieron mediante qPCR usando el ARN total extraído de raíces jóvenes y maduras, hojas, flores, semillas maduras y plántulas. AT4G01575 fue más fuertemente expresado en semillas y raíces maduras y en flor, mientras que fue débilmente detectado en hoja. En contraste AT3G61980 fue más específicamente detectado en plántulas y en flor y fue indetectable en raíces maduras. Estos resultados sugieren que ambos genes serían temporalmente regulados. Finalmente, mediante qPCR, analizamos la expresión de ambos genes en respuesta a la infección por el hongo patógeno B. cinerea. Las hojas infectadas mostraron un aumento significativo de la acumulación del transcripto AT3G61980 a las 24 horas post-inoculación (HPI), mientras que a nivel sistémico los niveles del transcripto no se vieron modificados. En contraste, la expresión del gen AT4G01575 se incrementó significativamente a las 48 HPI en las  hojas infectadas y a las 24 HPI a nivel sistémico. Estos resultados sugieren que la expresión de ambos genes puede ser inducida por B. cinerea y mostrarían un patrón diferencial de expresión durante la infección con dicho hongo.