Papel de la proteína Cysteine-String Protein (CSP) en el mecanismo de la exocitosis acrosomal en espermatozoides humanos.

RUETE CELESTE; FLORES MONTERO KARINA; BERBERIAN MARIA VICTORIA

Conferencia; Primer Congreso Interuniversitario I+D+i Mendoza; 2021

CONGRESO PROVINCIAL INTERUNIVERSITARIO DE I+D+iRole of Cysteine-String Protein (CSP) in the acrosomal exocytosis mechanism in human sperm Keywords: CSP, SNAREs, acrosomal exocytosis.Papel de la proteína Cysteine-String Protein (CSP) en el mecanismo de la exocitosis acrosomal en espermatozoides humanosLa proteína Cysteine-String Protein (CSP) es una chaperona que pertenece a la familia de proteínas DnaJ/Hsp40, descritas inicialmente en vesículas sinápticas neuronales. Estudios posteriores demostraron su presencia en varios orgánulos secretores y tejidos de vertebrados (por ejemplo, testículos), lo que nos llevó a asumir la presencia en espermatozoides humanos. Uno de los principales eventos para la fertilización de los ovocitos es la reacción acrosomal en los espermatozoides. La reacción acrosomal es una exocitosis regulada de un solo gránulo plano grande, el acrosoma. La liberación del contenido del acrosoma y la liberación de las enzimas que facilitan el pasaje del espermatozoide a través de la zona pelucida del ovocito, implica la fusión de la membrana acrosomal externa y la membrana plasmática, gracias al ensamblaje de las proteínas SNARE en configuración trans, lo que provoca el acoplamiento irreversible de estas membranas.Dado que el papel de CSP en el espermatozoide humano aún no se conoce, este trabajo tiene como objetivo determinar la presencia, ubicación y función de esta proteína en el ensamblaje de los complejos trans-SNARE durante la exocitosis acrosomal.Utilizando western blot, inmunofluorescencia y fraccionamiento subcelular demostramos la presencia de CSP en la cabeza del espermatozoide humano, unida predominantemente a membrana. Mediante ensayos funcionales, microscopia de fluorescencia y electrónica y abordajes bioquímicos y de biología molecular demostramos que CSP es necesaria en la secreción del acrosoma ya que la incorporación del anticuerpo (anti-CSP) o de la proteína exógena, al espermatozoide inhiben la reacción acrosomal de manera dependiente de la concentración. También utilizando un quelante de calcio fotolábil, NP-EGTA-AM, observamos que CSP actúa antes de la liberación de calcio intracelular. Al implementar toxinas, como el tétanos, pudimos monitorear el estado de ensamblaje de las SNARE y demostrar que CSP participa en el ensamblaje trans de estas proteínas. Para estos ensayos trabajamos con anticuerpos anti-CSP y proteínas recombinantes permeables (unidas a un Péptidos de Penetración Celular (CPP)) y no permeables. Nuestros resultados apoyan la noción de que la proteína CSP participa en el proceso de la exocitosis acrosomal y está involucrada en el ensamblaje del complejo trans-SNARE.