DETERMINACION DE LA INTERFERENCIA DE LA ZONA PELUCIDA EN LA OBTENCION DE LOS ESPECTROS RAMAN DEL CITOPLASMA DE OVOCITOS BOVINOS INMADUROS Y MADURADOS IN VITRO.

JIMENEZ, LUIS EMANUEL; ROLDÁN-OLARTE, EUGENIA MARIELA; ALVAREZ, ROSA MARIA SUSANA

San Miguel de tucuman

Congreso; XXI Congreso Argentino de Fisicoquímica y Química Inorgánica; 2019

Asociación Argentina de Investigación Fisicoquímica

Introducción La zona pelúcida (ZP), matriz extracelular que rodea a los ovocitos de mamíferos, está compuesta por glicoproteínas, que interfieren en el estudio de su citoplasma por microscopia Raman. Dichas interferencias se deben a que las bandas de las proteínas son muy intensas en el espectro y a la superposición espectral de las bandas de azúcares con las componentes del citoplasma. Con el propósito de estudiar los cambios bioquímicos que ocurren en el citoplasma durante la maduración del ovocito, es necesario eliminar la contribución espectral de la ZP. Es por ello, que en el presente trabajo, se lleva a cabo la comparación de 2 métodos que permiten eliminar dicha contribución. El primero, consiste en la disgregación enzimática de la ZP (INM-S-ZP y MIV-S-ZP), mientras que el segundo, se basa en la resta espectral de la ZP al citoplasma (INM-R-ZP y MIV-R-ZP), obteniéndose de este modo, espectros Raman puros del citoplasma de ovocitos bovinos inmaduros (INM) y madurados in vitro (MIV).Resultados Al comparar ambos métodos se observó que la disgregación enzimática muestra cambios más significativos en los perfiles espectrales y una mayor intensificación de las bandas a ~1300 (lípidos) y 1003 cm-1 (proteínas), con respecto al método de la resta espectral, el cual, no permite la eliminación total del espectro de la ZP al del citoplasma. Para determinar la eficiencia de ambos métodos, se utilizó el software OMNIC Specta, herramienta de búsqueda de contaminantes. En efecto, la resta aritmética aplicada a los espectros INM y MIV de ovocitos completos solo eliminó el 23% y el 10%, respectivamente, de la contribución espectral total de ZP.Por otro lado, se aplicó análisis de componentes principales (ACP) a los espectros sin ZP. Se observó en este análisis estadístico que el 20% de los espectros MIV-S-ZP no completó con éxito la maduración. Esto concuerda con los resultados obtenidos empleando la técnica de tinción nuclear de Hoëchst 33342 (indicador de la maduración). Conclusiones: La ZP interfiere en la detección de los cambios espectrales que ocurren en el citoplasma durante la maduración. Al eliminar esta interferencia se identificaron los marcadores espectrales de la maduración y se asignaron la mayoría de las bandas presentes en la subregión entre 1800 y 900 cm-1.