ESTUDIO POR MICROESPECTROSCOPIA RAMAN DE LOS COMPONENTES BIOQUIMICOS DEL CITOPLASMA DE OVOCITOS BOVINOS INMADUROS Y MADURADOS IN VITRO

ALVAREZ, R.M.S.; ROLDÁN-OLARTE, M.; JIMENEZ, L.E.

Carlos Paz

Congreso; XX Congreso Argentino de Fisicaquímica y Química Imorgánica; 2017

Asociación Argentina de Investigación Fisicoquímica

Motivación: Los ovocitos sufren cambios significativos durante la maduración in vitro tanto a nivel citoplasmático como nuclear, es una etapa crucial para el éxito de los eventos posteriores de fecundación in vitro y desarrollo embrionario temprano. Durante este proceso ocurre un aumento y redistribución de organelas, como también cambios en el perfil bioquímico del citoplasma debido a un incremento en la transcripción, síntesis de proteínas y lípidos, mientras que los carbohidratos, al ser utilizados como fuentes de energía, disminuyen en cantidad (1). En el presente trabajo se emplearon ovocitos a los que les eliminó su zona pelúcida (ZP) con el fin de disminuir las posibles contribuciones de las moléculas allí presentes, que fueron ya analizadas y caracterizadas en detalle por nuestro grupo de trabajo (2).Resultados: Se registraron los espectros Raman del citoplasma de ovocitos inmaduros (INM) y madurados in vitro (MIV) sin ZP, la cual fue eliminada con la enzima pronasa. La comparación entre espectros promedios de ovocitos INM y MIV manifiesta un marcado aumento en las intensidades de las bandas características de lípidos (1440, 1300, 1268, 1120, 1080 y 1062 cm-1) y una mayor definición de las bandas de ADN (1580, 1530, 1269 cm-1), a la vez que las bandas de proteínas (1655, 1605, 1030 y 1000 cm-1) y de azúcares (1633, 1405, 1381 cm-1) se observan menos intensas. Conclusiones: El aumento lipídico encontrado está en concordancia con la formación de vesículas y reservas energéticas, propias del estado maduro de los ovocitos. En el caso de las proteínas, a pesar que hay aumento en su síntesis durante la maduración, las intensidades de sus bandas características no lo evidencian, lo que sugiere que una proporción significativa de proteínas se encuentra en el interior de dichas vesículas o formando parte de las membranas de las organelas. Este efecto estaría relacionado con la observación de las bandas de ADN más intensas y definidas en los espectros MIV. El consumo de azúcares durante la maduración también se manifiesta en los espectros Raman como la desaparición y/o disminución de sus bandas características.Referencias:1)Bryony Davidson, Alison A. Murray, Alistair Elfick, Norah Spears. PLoS ONE, 2013, 8, e67972.2)G. Rizo, M. Roldán-Olarte, D. C. Miceli, L. E. Jimenez and R. M. S. Alvarez. RSC Adv., 2016, 6, 83429.