Estudios de comunidades bacterianas del género Pseudomonas en suelo y rizosfera de lotes agrícolas bajo siembra directa en Argentina.

AGARÁS B; WALL LG; VALVERDE C

Montevideo

Congreso; XX Reunión Latinoamericana de Microbiología; 2010

Asociación Latinoamericana de Microbiología

En Argentina, los suelos destinados a la agricultura están siendo principalmente manejados con siembra directa, dejando de lado la labranza tradicional. Con el fin de evaluar los efectos de este manejo sobre la biología del suelo y su productividad, se ha constituido el consorcio de investigación público-privado denominado BIOSPAS. En este marco, nuestro laboratorio estudia al género Pseudomonas spp., desarrollando un procedimiento para seleccionar, cuantificar y analizar la diversidad de este grupo, el cual es de gran importancia en este ecosistema por sus reconocidas propiedades promotoras del desarrollo vegetal. Las muestras comprenden suelo desnudo y rizósfera de los cultivos allí sembrados. Para la cuantificación de bacterias cultivables se hicieron plaqueos en dos medios de cultivo: uno nutricionalmente pobre (TSA 10%) para el recuento de heterótrofas mesófilas totales; otro selectivo (Gould’s S1) que nos permite estimar el número de bacterias mesófilas pertenecientes al género Pseudomonas spp. Además, se contabilizaron las pseudomonas fluorescentes, iluminando las placas con luz UV. A partir de estos cultivos, se llevaron a cabo estudios moleculares de diversidad empleando los genes oprF y gacA, previamente descritos como marcadores de este género bacteriano. Para ello, se desarrollaron oligonucleótidos específicos y se setearon esquemas de PCR-RFLP. Asimismo, se evaluó la correspondencia entre el crecimiento en S1, la presencia del gen oprF revelada por PCR y la pertenencia al género Pseudomonas, mediante secuenciación de los genes 16s y oprF de aislamientos morfológicamente diversos obtenidos a partir de los recuentos en placa con medio S1. De esta manera, se confirma el poder de selectividad del medio de cultivo, y se confirma la elección de oprF como gen marcador de género, permitiéndonos en el futuro desarrollar análisis moleculares de diversidad con este gen en forma independiente de cultivo, a través del análisis de extracciones directas de DNA de suelo y material rizosférico. La puesta a punto de estas metodologías constituye el punto de partida para el estudio de forma sistemática de las poblaciones de Pseudomonas spp. en suelos y rizósfera, y su aplicación en el análisis de los efectos de diferentes factores sobre dicha comunidad.