Identificación de protozoos de importancia sanitaria en mamíferos exóticos invasores de Argentina

RUNCO M; GOS ML; GUICHÓN ML; VENTURINI MC; CAMPERO LM

Jornada; XXI Jornadas de Divulgación Técnico-Científicas virtuales organizadas por la Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de Rosario, Argentina; 2021

Debido a actividades de origen antrópico en Argentina existen poblaciones establecidas de especies silvestres que se encuentran fuera de su rango de distribución natural, denominadas exóticas, y consideradas invasoras por los importantes daños ambientales, sanitarios y económicos que producen. Entre los mamíferos invasores presentes en nuestro país y que son estudiados en este trabajo, se encuentran el visón americano (Neovison vison), el jabalí europeo (Sus scrofa), el ciervo colorado(Cervus elaphus), la ardilla de vientre rojo (Callosciurus erythraeus), la rata negra (Rattus rattus), y la rata noruega (Rattus norvegicus). Todos ellos conviven con animales silvestres autóctonos donde comparten el mismo ambiente y también con animales de producción y de compañía ya que cohabitan en las cercanías de establecimientos ganaderos y zonas residenciales, respectivamente. A su vez pueden interactuar con las personas mediante encuentros azarosos o actividades que impliquen sumanipulación/consumo, como ocurre con la caza de especies cinegéticas. La presencia de parásitos protozoarios como Toxoplasma gondii, Neospora caninum, Sarcocystis spp. y Cryptosporidium spp. en las especies silvestres exóticas representa un riesgo para la salud pública y animal ya que estos mamíferos podrían actuar como fuentes de trasmisión, diseminación y reservorios de dichas parasitosis. Al igual que T. gondii, ciertas especies de Sarcocystis spp. y Cryptosporidium spp. sonzoonóticas, la infección puede darse tras ingerir ooquistes presentes en el agua, verduras mal lavadas o en el caso de los dos primeros, también por el consumo de carne cruda o mal cocida que contenga quistes tisulares 1, 2 . En tanto que N. caninum se destaca por producir abortos en bovinos, afectando negativamente su producción, siendo el consumo de ooquistes presentes en el medio un modo de transmisión de la enfermedad 3 .Si bien mundialmente existen evidencias serológicas y moleculares sobre la presencia de estos protozoarios en la fauna silvestre 2, 3, 4 , a nivel nacional la mayoría de los trabajos consiste en reportes de casos y no poseen un enfoque epidemiológico. El objetivo de este trabajo es  determinar la presencia de los parásitos apicomplexa previamentemencionados en mamíferos silvestres introducidos en Argentina y relacionar los genotipos hallados con la interfaz animal-hombre-ecosistema con el fin de evaluar el rol de los mamíferos exóticos en laepidemiología de los mismos. Se trabajará con muestras tomadas de individuos silvestres de N. vison, S. scrofa, C. elaphus, R. rattus y R. norvegicus en la provincia de Neuquén y con muestras tomadas deindividuos de C. erythraeus, R. rattus y R. norvegicus en el noreste de la provincia de Buenos Aires a través de la colaboración con el Grupo de Ecología Terrestre de Neuquén (CEAN-CONICET) y el GrupoEcología de Mamíferos Introducidos de la Universidad Nacional de Luján, respectivamente. Los animales muestreados provienen de actividades dentro de programas de control poblacional y cuentan con la aprobación del CICUAL (Comité Internacional del Cuidado y Uso de Animales deLaboratorio) correspondiente. Hasta el momento se muestrearon un total de 42 ejemplares de N. vison en el sur de la provincia de Neuquén. De cada individuo se colectaron los siguientes tejidos: cerebro, pulmón, hígado, músculos de miembro posterior, lengua y corazón, que se conservaron a -20ºC, y última porción del intestino, heces y suero sanguíneo que fueron refrigerados. Del total de visones americanos muestreados se han analizado cerebros y pulmones de 18 de ellos (16 adultos: 14 machos y 2 hembras, y una hembra subadulta y otra joven) para detectar ADN de T. gondii y N. caninum por la técnica de PCR. De cada órgano se realizó un homogenato con el fin de obtener una muestra representativa, y utilizando el kit comercial Wizard Genomic DNA Purification Kit (Promega, EE.UU.) se extrajo ADN de los tejidossiguiendo las recomendaciones del fabricante. Se utilizó el par de primers específicos TOX5/TOX8 y Np6+/Np21+ para la detección de T. gondii y N. caninum, respectivamente. Los productos amplificados se revelaron en un gel de agarosa al 1,5% con SYBR safe (Invitrogen, EE.UU.). La lectura se realizó con un transiluminador de luz azul (Safe Imager TM, Invitrogen, EE.UU.). Se observó la detección de bandas de 450 bp y 337 bp de T. gondii y N. caninum, respectivamente, tomando de referencia el marcador de peso molecular de 100 bp. A partir del suero sanguíneo se realizará la técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI) para la detección de anticuerpos anti-T. gondii y anti-N. caninum en todas las especies excepto en aquellas que carecen de conjugados específicos (N. vison y C.  erythraeus), para las cuales se desarrollará y estandarizará una prueba de aglutinación modificada para el diagnóstico serológico de toxoplasmosis(MAT). Además, se procesarán 10 gramos de músculo de cada ejemplar para la identificación en fresco de quistes tisulares de Sarcocystis spp. Se preservarán los quistes observados en glutaraldehído al 2 % para estudios de caracterización de la pared quística mediante microscopía de transmisión electrónica (MET) y para su posterior caracterización molecular. A su vez se realizarán raspados de mucosa intestinal con la finalidad detectar ooquistes/esporozoítos tras la concentración de la materia fecal por técnicas de flotación. De forma semejante se concentrarán los ooquistes de Cryptosporidium spp. presentes en el producto del raspado de mucosa intestinal por sedimentación en agua, flotación en solución concentrada de azúcar y luego se coloreará por la técnica de Ziehl-Neelsen (modificada) para poder observarlos. El material restante de las muestras positivas de ambos protozoarios se concentrará por sedimentación-flotación para la caracterización molecular. Para los estudios moleculares se analizarán las muestras de tejidos (cerebro y pulmón) y de materia fecal previamente mencionadas por medio de la técnica de Reacción en cadena de la Polimerasa (PCR) utilizando primersespecíficos. El 11% (2/18) de las muestras de cerebro resultaron positivas a T. gondii, en tanto que los pulmones de estos individuos fueron negativos. En ninguno de los tejidos analizados se detectó ADN de N.caninum. La presencia de ADN de T. gondii en el tejido nervioso es indicativo de una infección crónica que pudo surgir de un ambiente contaminado con ooquistes o tras la ingestión de presas infectadasdebido a su dieta carnívora, motivo por el cual se considera a N. vison como una especie centinela que refleja el estado del ambiente gracias a sus hábitos acuáticos y terrestres. La ausencia de ADN de N. caninum en las muestras analizadas no descarta la posibilidad de infección en estos mamíferos exóticos, ya que es necesario evaluar mayor cantidad de animales. Se seguirán realizando estudios para determinar también la presencia de los otros parásitos protozoarios en estas especies exóticas denuestro país.