La activación de los receptores metabotrópicos del glutamato (mGluR) de tipo II modula la apoptosis inducida por óxido nítrico en astrocitos

DURAND DANIELA; PÉREZ MARÍA DE LA CRUZ; CARUSO CARLA; LASAGA MERCEDES

La Falda, Córdoba, Argentina

Taller; IX Taller Argentino de Neurociencias; 2007

Taller Argentino de Neurociencias

Los astrocitos desempeñan un rol neuroprotector en el Sistema Nervioso Central (SNC) en condiciones patológicas. Por lo tanto, estrategias que contribuyan con su supervivencia pueden resultar en importantes beneficios terapéuticos. Los astrocitos expresan receptores metabotrópicos para el glutamato (mGluRs) y dicha expresión varía en respuesta a factores de crecimiento o a distintos tipos de daño cerebral. Los mGluRs regulan la proliferación, diferenciación y apoptosis en el SNC y existen amplias evidencias que sugieren un rol neuroprotector de varios subtipos de mGluRs. En el presente trabajo, investigamos el efecto de la activación de los mGluR de tipo II sobre la expresión génica de la óxido nítrico sintasa inducible (iNOS) inducida por la combinación de lipopolisacárido bacteriano (LPS) + interferón- gama (IFN- gama) y sobre la apoptosis inducida por óxido nítrico (NO) en cultivos primarios de astrocitos de rata. El tratamiento con LPS (1 ug/ml) + IFN- (50 ng/ml) durante 24h indujo la expresión génica de iNOS, mientras que no detectamos expresión de esta enzima en el grupo control (por RT-PCR). La presencia de un agonista selectivo de los mGluR de tipo II (Ly 379268 100 uM) diminuyó este efecto en un 75% (p0.05). Dado que el NO es el mayor mediador citotóxico de la apoptosis en astrocitos, determinamos el grado de fragmentación del ADN en células tratadas con NO por el método de TUNEL. La exposición durante 48 h a DETA/NO 1 mM (un dador de NO) incrementó el porcentaje de astrocitos TUNEL-positivos en un 27.5% (p0.05), mientras que este incremento fue significativamente atenuado en presencia de Ly 379267 (p0.05). El agonista per se no modificó el porcentaje de astrocitos TUNEL-positivos. Además, evaluamos si variaciones en los niveles proteicos de los miembros de la familia Bcl-2 estaban involucradas en la acción protectora de los mGluRII. El NO disminuyó significativamente los niveles proteicos totales del factor anti-apoptótico Bcl-2 en un 85% (p0.001, determinados por Western-blot), mientras que en presencia del agonista de mGluRII esta reducción fue significativamente menor (p0.05). Sin embargo, si bien el NO incrementó los niveles de la proteína proapoptótica Bax, no observamos efecto de la activación de mGluRII sobre tal incremento. Por otro lado, la muerte celular inducida por NO no dependería de la activación de Caspasa-3, ya que el NO no modificó la actividad de esta enzima, al igual que las otras condiciones experimentales. Nuestros resultados sugieren que la activación selectiva de los mGluR del grupo II podría desempeñar un papel modulatorio sobre procesos inflamatorios y apoptóticos en astrocitos, probablemente a través de la regulación de la expresión de iNOS y Bcl-2, efectos que no dependerían de las modificaciones en los niveles proteicos de Bax ni de la actividad de caspasa-3.