INVESTIGADORES
MORI SEQUEIROS GARCIA Maria De Las Mercedes
congresos y reuniones científicas
Título:
La activación de la fosfolipasa A2 por dopamina involucra la generación de ROS y la activación de ERK1/2 en células de túbulo proximal renal
Autor/es:
ACQUIER AB; MORI SEQUEIROS GARCÍA MM; GOROSTIZAGA AB; MARCHIONE V; GOMEZ N; PAZ C; MENDEZ CF
Lugar:
Mar del Plata, Buenos Aires
Reunión:
Congreso; LVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica.; 2012
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
Reportamos previamente la participación de la proteína kinasa
C (PKC) y de las especies reactivas del oxígeno (ROS) en la ac
-
tivación de la kinasa de señales extracelulares 1 y 2 (ERK1/2) y
del factor nuclear kB (NF-kB) en la vía de transducción de señales
de la dopamina (DA) en células de túbulo proximal renal. Dado
que en diversos sistemas la actividad de la enzima fosfolipasa A
2
(FLA
2
) es regulada por fosforilación por ERK1/2, nuestro objetivo
fue investigar el rol de esta kinasa en la regulación de la actividad
de FLA
2
por la DA. Se utilizaron células de la línea OK (
opossum
kidney
) y se estudió la expresión de las isoformas de la familia IV
de la FLA
2
por RT-PCR semicuantitativa, la localización subcelular
de FLA
2
IV A por microscopía de fluorescencia, la actividad de la
enzima por fluorometría y la liberación de ácido araquidónico (A
A)
por cromatografía en capa delgada (TLC). El análisis por PCR
demostró que las células OK expresan en forma mayoritaria la iso
-
forma IV A de la FLA
2
en favor de la forma IV B, no registrándose
expresión de la isoenzima IV C. DA (10
-6
M) promovió la activación
de FLA
2
en forma dependiente del tiempo, con un máximo a los
15 min de estimulación (control: 2,58±0,04; DA: 3,46±0,10 U/mg,
p<0,01) y su translocación desde el citosol a las regiones nuclear
y perinuclear. La preincubación de las células con los inhibidores
de la activación de ERK1/2 (PD98059, 5x10
-5
M) o de PKC (Ro-
318220, 10
-8
M), o con el antioxidante N-acetilcisteína (NAC, 10
-
3
M) abolió el efecto de DA sobre la FLA
2
. DA promovió también
la liberación de AA al medio de cultivo, un efecto que fue abolido
en presencia del inhibidor de FLA
2
, AACOCF
3
(control: 2400±170
vs DA: 5200±260, p<0,01). Nuestros resultados demuestran la
activación de FLA
2
por DA, por un mecanismo que involucra la generación de ROS y la participación de ERK1/2
