INVESTIGADORES
MORI SEQUEIROS GARCIA Maria De Las Mercedes
congresos y reuniones científicas
Título:
ACTIVACIÓN TRANSCRIPCIONAL DEL GEN DE LA MAP QUINASA FOSFATASA-1 (MKP-1) Y DEL MARCADOR DE ESTRÉS DE RETÍCULO ENDOPLÁSMICO GRP78 EN CÉLULAS DE TÚBULO PROXIMAL RENAL DE ZARIGÜEYA (OK) EXPUESTAS A ALBÚMINA.
Autor/es:
GOROSTIZAGA AB; GOMEZ NV; ACQUIER AB; MORI SEQUEIROS GARCÍA MM; BEKIER F; MENDEZ CF; PAZ C
Lugar:
Mar del Plata, Buenos Aires
Reunión:
Congreso; LVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica.; 2012
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
La sobrecarga de albúmina produce estrés de retículo endo
-
plásmico (ER) y desencadena la activación de las MAPK quinasas
(MAPKs) ERK1/2, JNK y p38. Las MAPK fosfatasas (MKPs) son
enzimas que inactivan a las MAPKs e inducibles por los mismos
estímulos que activan las MAPKs. MKP-1 se localiza mayormen
-
te en el núcleo y desfosforila a todas las MAPKs. Previamente
describimos que en células de túbulo proximal renal de zarigüeya
(OK), la exposición a albúmina sérica bovina (BSA) incrementa
transitoriamente los niveles de ERK1/2 fosforilada y de MKP-1.
Nuestro objetivo fue avanzar en la caracterización molecular y
funcional de MKP-1 en células OK expuestas a BSA (20 mg/ml).
Dado que no se conoce la secuencia del genoma de zarigüeya
(
Didelphis virginiana), utilizamos la secuencia de MKP-1 de una
especie altamente emparentada (
Monodelphis sp
) para el diseño
de oligonuclétidos que se usaron en ensayos de RT-PCR usando
como templado ARN de células OK. El fragmento de ADNc aislado
resultó ser 98% homólogo a MKP-1 de
Monodelphis sp.
En base
a esta secuencia se diseñaron oligonucleótidos para evaluar el
efecto de la BSA sobre los niveles del ARNm de MKP-1, por RT-
PCR semicuantitativa. La BSA incrementó en forma transitoria los
niveles del ARNm (2 veces vs. control luego de 1h). Dado que ActD
bloqueó este efecto, se deduce que la BSA activa la transcripción de
MKP-1. Este efecto contribuiría al aumento de MKP-1 previamente
detectado por Western blot, y particularmente en el núcleo como
demostramos aquí por inmunocitoquímica. La BSA aumentó el
ARNm correspondiente
a GRP78, proteína marcadora de ER y un
inhibidor de la activación de ERK1/2 (PD98059, 50 μM) evitó este
efecto. En conjunto nuestros datos indican que MKP-1 es inducida
por BSA no solo a nivel post-traduccional como ya demostramos,
sino también a nivel transcripcional, y sugieren que podría contribuir
al apagado de aquellos eventos dependientes de ERK1/2 que son disparados por BSA, como la inducción de GRP78